Zestaw do szybkiego testu mleka melaminy ELISA do wykrywania mleka 96 studzienek / zestaw ISO9001

Zestaw testowy ELISA na melaminę do wykrywania mleka 96 studzienek/zestaw ISO9001

 

1. Zasada

Ten zestaw testowy jest oparty na pośrednim kompetycyjnym teście immunologicznym do wykrywania melaminy w próbce.Antygen sprzęgający jest wstępnie opłaszczony na paskach mikrostudzienek.Melamina w próbce i antygeny sprzęgające wstępnie powleczone na paskach z mikrostudzienkami konkurują o przeciwciała przeciwko melaminie.Po dodaniu koniugatu enzymu dodaje się substrat TMB w celu zabarwienia.Wartość gęstości optycznej (OD) badanej próbki ma ujemną korelację ze stężeniem melaminy w próbce.Wartość tę porównuje się z krzywą standardową i następnie uzyskuje się stężenie melaminy.

 

 

2.Zestaw do badania mlekaskładniki

1	Paski mikrodołków	12 pasków z 8 wyjmowanymi studnie każda
2	6× roztwór standardowy (każdy po 1 ml)	0 ppb	0,5 ppb
		1,5 ppb	4,5 ppb
		13,5 ppb	40,5 ppb
3	Wzbogacanie roztworu standardowego	1 ppm	1 ml
4	Koniugat enzymu	7ml	czerwona czapka
5	Roztwór roboczy przeciwciała	7ml	niebieska czapka
6	Podłoże A	7ml	Biała czapka
7	Podłoże B	7ml	czarna czapka
8	Zatrzymaj rozwiązanie	7ml	żółta czapka
9	10-krotna ekstrakcja próbki Rozwiązanie	50 ml	przezroczysta czapka
10	20x roztwór B do ekstrakcji próbki	50 ml	niebieska czapka
11	20× skoncentrowany bufor do płukania	15 ml	Biała czapka

 

3. Specyfikacje techniczne

Czułość: 0,5 ppb

Temperatura inkubatora: 25 ℃

Czas inkubacji: 30min ~ 15min

Granica wykrywalności:

Masło, słodycze, ser 10 ppb

Szybkość reakcji krzyżowych:

Melamina 100%

Wskaźnik odzysku:

Masło 90±25%

Cukierki, sery 95±25%

 

4. Materiały wymagane, ale niedostarczone

1) Wyposażenie: czytnik mikropłytek, drukarka, wirówka, wirówka, pipety pomiarowe, waga (odwrotna czułość 0,01 g), łaźnia wodna 70 ℃;

2) Mikropipetory: jednokanałowe 20~200 µL, 100~1000 µL;i wielokanałowy 30 ~ 300 μl;

 

5. Wstępna obróbka próbki

Instrukcje (przed obróbką wstępną należy zająć się następującymi punktami)

1) Do eksperymentów można używać tylko końcówek jednorazowych, a końcówki należy wymieniać, gdy są używane z różnymi odczynnikami;

2) Przed eksperymentem każdy sprzęt doświadczalny musi być czysty iw razie potrzeby powinien zostać ponownie oczyszczony, aby uniknąć zanieczyszczenia, które zakłóca wyniki eksperymentu.

Przygotowanie roztworu

1) Ekstrakcja próbki Roztwór

Rozcieńczyć 10x Ekstrakcja próbki Roztwór wodą dejonizowaną w stosunku 1:9;

2) Roztwór B do ekstrakcji próbki

Rozcieńczyć 20-krotny roztwór B do ekstrakcji próbki wodą dejonizowaną w stosunku 1:19.

 

5.1 Masło

1) Wziąć 1 g świeżego masła do probówki wirówkowej o pojemności 50 ml, dodać 5 ml Roztwór do ekstrakcji próbki A, inkubować w łaźni wodnej o temperaturze 70°C przez 5 minut, worteksować i wstrząsać przez 5 minut, wirować z prędkością powyżej 4000 obr./min w temperaturze pokojowej przez 5 minut;

2) Weź do analizy 50 µl płynu z dolnej warstwy

Fałda rozcieńczenia próbki: 5

5.2 Cukierki, ser

1) Wziąć 1 g świeżej próbki do probówki wirówkowej o pojemności 50 ml, dodać 5 ml roztworu B do ekstrakcji próbki, inkubować w łaźni wodnej o temperaturze 70°C przez 5 min, worteksować i wstrząsać przez 5 min, wirować z prędkością powyżej 4000 obr/min w temperaturze pokojowej przez 5 min;

2) Weź do analizy 50 µl płynu z dolnej warstwy

Fałda rozcieńczenia próbki: 5

 

6. Procedury ELISA

6.1 Instrukcje

1 Doprowadzić wszystkie odczynniki i paski z mikrostudzienkami do temperatury pokojowej (20-25 ℃).

2 Natychmiast po użyciu przywróć wszystkie odczynniki do temperatury 2-8 ℃.

3 Powtarzalność analizy ELISA w dużym stopniu zależy od konsystencji przemywanej płytki.Prawidłowe działanie przemywania płytek jest kluczowym punktem w procedurach ELISA.

4 W przypadku inkubacji w stałych temperaturach wszystkie próbki i odczynniki nie mogą być wystawione na działanie światła, a każda mikropłytka powinna być szczelnie zamknięta membraną.

6.2 Procedury operacyjne

1)Doprowadzić zestaw testowy do temperatury pokojowej (20-25 ℃) na co najmniej 30 min, pamiętać, że przed użyciem należy równomiernie wstrząsnąć każdym odczynnikiem;umieścić wymagane paski mikrodołków w ramkach płytek.Ponownie zamknij nieużywaną mikropłytkę, przechowuj w temperaturze 2-8 ℃, nie zamrażaj.

2)Przygotowanie roztworu: rozcieńczyć 15 ml 20X stężonego buforu do płukania wodą dejonizowaną do 300 ml do użycia;

3)Numeracja: ponumerować mikrostudzienki zgodnie z próbkami i roztworem wzorcowym;każdą próbkę i roztwór wzorcowy należy wykonać w dwóch powtórzeniach;zanotować ich pozycje.

4)Dodać 50 µl próbki/roztworu wzorcowego do oddzielnych duplikatów studzienek, następnie dodać 50 µl koniugatu enzymu, następnie dodać 50 µl roztworu roboczego przeciwciała do każdej studzienki, odpowiednio wstrząsnąć, uszczelnić mikropłytkę membraną przykrywającą i inkubować w temperaturze 25°C przez 30 min;

5)Wylej płyn z dołków, przemyj mikropłytkę 5-6 razy rozcieńczonym buforem do płukania w ilości 250 µl/dołek.Każdorazowo moczyć dołek w rozcieńczonym buforze płuczącym przez 15-30 sekund, a następnie klapać do wyschnięcia na bibułce chłonnej (jeśli po trzepotaniu pojawiają się bąbelki, odciąć je czystymi końcówkami).

6)Zabarwienie: dodać 50 µl substratu A, następnie 50 µl substratu B do każdej studzienki.Delikatnie wymieszać, ręcznie wstrząsając płytką, i inkubować w temperaturze 25 ℃ przez 15 minut w ciemności w celu zabarwienia;

7)Oznaczanie: dodać 50 µl roztworu zatrzymującego reakcję do każdego dołka.Delikatnie wymieszać, ręcznie potrząsając płytką.Ustaw długość fali czytnika mikropłytek na 450 nm, aby określić wartość OD każdego dołka.(Zaleca się odczytanie wartości OD przy podwójnej długości fali 450/630nm w ciągu 5 minut).

 

7. Ocena wyniku

Istnieją dwie metody oceny wyników;pierwszy to zgrubna ocena, a drugi to określenie ilościowe.Należy zauważyć, że wartość OD próbki ma ujemną korelację z zawartością melaminy.

7.1 Określenie jakościowe

Zakres stężeń (ng/ml) można uzyskać porównując średnią wartość OD badanej próbki z wartością roztworu wzorcowego.Zakładając, że wartość OD próbkiⅠ wynosi 0,3, a próbkiⅡ 1,0, wartość OD roztworów wzorcowych wynosi: 2,043 dla 0ppb, 1,604 dla 0,5ppb, 1,101 dla 1,5ppb, 0,512 dla 4,5ppb, 0,161 dla 13,5ppb , 0,055 dla 40,5 ppb, odpowiednio zakres stężeń próbki Ⅰ wynosi od 4,5 do 13,5 ppb, a próbki Ⅱ ​​od 1,5 do 4,5 ppb.

7.2 Oznaczanie ilościowe

Średnie wartości absorbancji są równoważne procentowi średniej wartości OD (B) badanej próbki i roztworu wzorcowego podzielonej przez wartość OD (B0) pierwszego roztworu wzorcowego (standard 0), a następnie pomnożonej przez 100 %, to znaczy

 

Procent wartości absorbancji =	B	×100%
	B0

 

B — średnia (podwójne studzienki) wartość OD badanej próbki lub roztworu wzorcowego

B0 — średnia wartość OD roztworu wzorcowego 0 ng/mL

Narysuj krzywą wzorcową z procentami absorpcji roztworów wzorcowych i wartościami semilogarytmicznymi roztworów wzorcowych melaminy (ng/ml) odpowiednio na osiach Y i X.Odczytać odpowiednie stężenie badanej próbki z krzywej wzorcowej poprzez włączenie jej procentowej absorpcji do krzywej wzorcowej.Otrzymaną wartość następnie mnoży się przez odpowiednią krotność rozcieńczenia, ostatecznie uzyskując stężenie melaminy w próbce.

 

8. Środki ostrożności

1)Temperatura pokojowa poniżej 25 ℃ lub temperatura odczynników i próbek testowych nie przywrócona do temperatury pokojowej (20-25 ℃) doprowadzi do niższej standardowej wartości OD.

2)Suchości mikropłytki w procesie mycia towarzyszyć będą sytuacje, w tym nieliniowe krzywe standardowe i niepożądana powtarzalność;Więc przejdź do następnego kroku natychmiast po umyciu.

3)Mieszaj równomiernie, w przeciwnym razie wystąpi niepożądana powtarzalność.

4)Roztworem zatrzymującym jest 2 M roztwór kwasu siarkowego, unikać kontaktu ze skórą.

5)Nie używać zestawu po upływie terminu ważności.Użycie rozcieńczonych lub zafałszowanych odczynników z zestawów spowoduje zmianę czułości i wartości OD wykrywania.Nie wymieniać odczynników z zestawów o różnych numerach partii do użycia.

6)Włóż nieużywaną mikropłytkę do automatycznie zamykającej się torebki, aby ją ponownie zamknąć.Standardowa substancja i bezbarwny barwnik są światłoczułe, dlatego nie można ich bezpośrednio wystawić na działanie światła.

7)Wyrzucić roztwór barwiący o dowolnym kolorze, który wskazuje na degenerację tego roztworu.Wartość wykrywalna roztworu wzorcowego 1(0 ppb) mniejsza niż 0,5 wskazuje na jego degenerację.

8)Optymalna temperatura reakcji to 25 ℃, a zbyt wysoka lub niska temperatura spowoduje zmianę czułości detekcji i wartości OD.

 

9. Przechowywanie i data ważności

Przechowywanie: przechowywane w temperaturze 2-8 ℃, niezamrożone.

Data ważności: 12 miesięcy;data produkcji na opakowaniu

Uwaga: Jeśli opakowanie próżniowe mikropłytki jest nieszczelne, nadal można go używać, nie wpływa na wynik testu, można go zrelaksować.

 

 

P1: Ile czasu zajmie wysłanie?
A1: Zazwyczaj wysyłamy w ciągu 7 dni roboczych.

 

P2: Czy wspierasz OEM/ODM?
A2: może być obsługiwany.Możemy dostosować do twoich konkretnych potrzeb i określonych ilości.

 

P3: Jak radzi sobie Twoja fabryka pod względem kontroli jakości?
A3: Posiadamy certyfikat ISO9001 i certyfikat ISO13485, jak dotąd cały proces produkcyjny, mamy standardowe zasady, przestrzegamy odpowiednich zachowań i praw rządu.

 

P4: Czy serwis posprzedażny jest gwarantowany?
A4: Zapewniamy profesjonalną techniczną obsługę posprzedażną online.Jeśli produkt zawiedzie podczas eksperymentu, możemy to zapewnić
indywidualne doradztwo przez telefon, wideo i inne formy.

 

P5: Jaka jest minimalna ilość zamówienia?
A5: 1 zestaw.

 

P6: jaka jest metoda wysyłki?
A6: Może być wysyłany ekspresowo (FEDEX, UPS, DHL, EMS itp.) Lub drogą powietrzną i naziemną. Proszę potwierdzić z nami przed złożeniem zamówienia.