Zestaw szybkiego testu żywności Nitrofuran AHD ELISA Przeciwciało na wrażliwość na mleko 0,04 ppb 96 studzienek / zestaw

Zestaw testowy bezpieczeństwa żywności Nitrofuran AHD ELISA dla wrażliwości na mleko 0,04 ppb 96 studzienek / zestaw

 

1.Zestaw testowy bezpieczeństwa żywności Nitrofuran AHD ELISAZasada

 

Ten zestaw testowy jest oparty na kompetycyjnym teście immunoenzymatycznym do wykrywania aminohydratacji (AHD) w próbce.Antygeny sprzęgające są wstępnie powlekane na paskach mikrostudzienek.Aminohydrantacja (AHD) w próbce i antygeny sprzęgające wstępnie pokryte na paskach mikrostudzienek konkurują o przeciwciała anty-AHD.Po dodaniu koniugatu enzymu dodaje się substrat TMB w celu zabarwienia.Wartość gęstości optycznej (OD) próbki ma ujemną korelację z zawartym w niej AHD.Wartość tę porównuje się z krzywą standardową, a następnie uzyskuje się stężenie AHD.

 

2.Zestaw testowy bezpieczeństwa żywności Nitrofuran AHD ELISASpecyfikacja techniczna

 

Czułość: 0,04 ppb

Temperatura inkubacji: 25 ℃

Czas inkubacji: 30 min ～ 15 min

Granica wykrywalności Tkanka, jajko, miód: 0,1 ppb

Wskaźnik reakcji krzyżowej

AHD 100%

AMOZ < 0,1%

AOZ < 0,1%

SEM < 0,1%

Wskaźnik odzysku

Tkanka, jajko 95±25%

Miód 75±25%

 

3. Komponenty

 

1	Paski z mikrodołkami	12 pasków z 8 wyjmowanymi studnie każdy
2	6× roztwór wzorcowy (po 1 ml)	0ppb	0,04ppb
		0,12 ppb	0,36 ppb
		1,08ppb	3,24ppb
3	Koniugat enzymatyczny	7ml	czerwona czapka
4	Roztwór roboczy przeciwciał	7ml	niebieska czapka
5	Podłoże A	7ml	Biała czapka
6	Podłoże B	7ml	czarna czapka
7	Zatrzymaj rozwiązanie	7ml	żółta czapka
8	20× skoncentrowany bufor do płukania	40ml	Biała czapka
9	2× stężony roztwór do ponownego rozpuszczania	50ml	przezroczysta czapka
10	Aldehyd 2-nitrobenzowy (C7H5NO3)	10ml	czarna czapka

 

4. Materiały wymagane, ale niedostarczone

 

1) Wyposażenie: czytnik mikropłytek, drukarka, homogenizator, urządzenie do suszenia azotem, wir, wirówka, pipety pomiarowe, waga (odwrotność 0,01 g), inkubator, łaźnia wodna;

2) Mikropipety: jednokanałowe 20-200 µl, 100-1000 µl i wielokanałowe 30～300 µl;

3) Odczynniki: NaOH, octan etylu, n-Heksan, HCl (ok. 36,5%), K2HPO4·3H2O

 

5. Wstępna obróbka próbki

 

Instrukcje

Przed wstępną obróbką jakiejkolwiek próbki należy uwzględnić następujące punkty:

1) Do eksperymentów można używać tylko jednorazowych końcówek, które należy wymieniać, gdy są używane do pochłaniania różnych odczynników;

2) Przed eksperymentem każdy sprzęt doświadczalny musi być czysty i powinien zostać ponownie oczyszczony w razie potrzeby, aby uniknąć zanieczyszczenia, które zakłóca wyniki eksperymentu.

Przygotowanie roztworu przed wstępną obróbką próbki:

a) 0,1 M K2HPO4: rozpuścić 11,4 g K2HPO4·3H2O w wodzie dejonizowanej do 500 ml.

b) 1 M HCl: rozpuścić 8,6 ml HCl (około 36,5%) w wodzie dejonizowanej do 100 ml.

c) 1 M NaOH: rozpuścić 4 g NaOH w dejonizowanej wodzie do 100 ml.

d) 2 x stężony roztwór do ponownego rozpuszczania rozcieńcza się wodą dejonizowaną w stosunku 1:1 (1 ml stężonego roztworu do ponownego rozpuszczania + 1 ml wody dejonizowanej), stosowanej do ponownego rozpuszczania próbki.

 

5.1 Przygotowanie próbek

a) Tkanka, jajko

1) Odważyć 1 ± 0,05 g homogenizowanej próbki, dodać 4 ml wody destylowanej, 0,5 ml 1 M HCl i 100 ul 2-nitrobenzaldehydu (C7H5NO3) do każdej probówki, wstrząsać prawidłowo przez 2 min;.

2) Inkubować w temperaturze 37 ℃ przez noc (około 16 godzin) lub inkubować w temperaturze 56 ℃ w łaźni wodnej (2 godziny).

3) Dodaj 5 ml 0,1 M K2HPO4, 0,4 ml 1 M NaOH i 6 ml octanu etylu do każdej probówki, wytrząsaj przez 30s.

4) Wiruj z prędkością powyżej 4000r/min w temperaturze pokojowej (20-25 ℃) przez 10 min (jeśli występuje emulsyfikacja lub warstwa octanu etylu nie wystarcza na 3 ml, inkubuj próbkę w 80 ℃ łaźni wodnej przez 10 min i wiruj wielokrotnie; lub zwiększ prędkość i wydłużyć czas wirowania).

5) Przenieś 3mL warstwy octanu etylu do nowej probówki wirówkowej i odparuj do sucha azotem lub powietrzem w 50℃.

6) Rozpuścić suche pozostałości w 2mL N-heksanu, dodać 1mL rozcieńczonego roztworu do ponownego rozpuszczania, prawidłowo mieszać przez 30 sekund, wirować z prędkością powyżej 4000 obr/min w temperaturze pokojowej (20-25℃) przez 10 min;Usuń górną warstwę N-heksanową (jeśli występuje Emulsyfikacja, po usunięciu górnej warstwy N-heksanowej, inkubuj próbkę w 70℃ łaźni wodnej przez 10-20 min, wielokrotnie wiruj).

7) Wziąć 50 µL dolnego do analizy.

Krotność rozcieńczenia próbki: 2

b) Miód

1) Odważyć 2± 0,05 g homogenizowanej próbki (miód), dodać 4 ml wody destylowanej, 0,5 ml 1 M HCl i 100 µl 2-nitrobenzaldehydu (C7H5NO3) do każdej probówki, prawidłowo wstrząsać przez 2 min;.

2) Inkubować w temperaturze 37 ℃ przez noc (około 16 godzin) lub inkubować w temperaturze 56 ℃ w łaźni wodnej (2 godziny).

3) Dodaj 5 ml 0,1 M K2HPO4, 0,4 ml 1 M NaOH i 6 ml octanu etylu do każdej probówki, wytrząsaj przez 30s.

4) Wiruj z prędkością powyżej 4000r/min w temperaturze pokojowej (20-25℃) przez 10min (jeśli występuje emulsyfikacja lub warstwa octanu etylu nie wystarcza na 3ml, inkubuj próbkę w 80℃ łaźni wodnej przez 10min i wiruj wielokrotnie; lub zwiększ prędkość i wydłużyć czas wirowania).

5) Przenieś 3mL warstwy octanu etylu do nowej probówki wirówkowej i odparuj do sucha azotem lub powietrzem w 50℃.

6) Rozpuścić suche pozostałości w 2mL N-heksanu, dodać 1mL rozcieńczonego roztworu do ponownego rozpuszczania, prawidłowo mieszać przez 30 sekund, wirować z prędkością powyżej 4000r/min w temperaturze pokojowej (20-25℃) przez 10 min;Usuń górną warstwę N-heksanową (jeśli występuje Emulsyfikacja, po usunięciu górnej warstwy N-heksanowej, inkubuj próbkę w 70℃ łaźni wodnej przez 10-20 min, wielokrotnie wiruj).

7) Wziąć 50 µL dolnego do analizy.

Krotność rozcieńczenia próbki: 1

 

6. Procedury ELISA

 

6.1 Instrukcje

1) Przed użyciem wszystkie odczynniki i paski z mikrostudzienkami należy doprowadzić do temperatury pokojowej (20-25 ℃);

2) Przywróć wszystkie odczynniki do 2-8 ℃ natychmiast po użyciu;

3) Powtarzalność analizy ELISA w dużym stopniu zależy od konsystencji płukania płytek.Prawidłowe działanie mycia płyt jest kluczowym punktem w procedurach ELISA;

4) W przypadku inkubacji w stałych temperaturach wszystkie próbki i odczynniki muszą unikać ekspozycji na światło, a każda mikropłytka powinna być uszczelniona membraną przykrywającą.

 

6.2 Procedury operacyjne

1) Doprowadź zestaw testowy do temperatury pokojowej (20-25 ℃) na co najmniej 30 minut, pamiętaj, że każdy odczynnik musi być wstrząsany w celu równomiernego wymieszania przed użyciem, umieść wymagane paski z mikrostudzienkami w ramkach płytek.Ponownie zamknij nieużywaną mikropłytkę, przechowuj w temperaturze 2-8 ℃, nie zamrażaj.

2) Przygotowanie roztworu: rozcieńczyć 40 ml 20 × stężonego buforu do płukania wodą dejonizowaną w stosunku 1:19 (1 część 20 × stężony bufor do płukania + 19 części wody dejonizowanej).Lub przygotuj w razie potrzeby.

3) Numeracja: ponumeruj mikrostudzienki według próbek i roztworu wzorcowego;każda próbka i roztwór wzorcowy powinny być wykonane w dwóch egzemplarzach, zanotować ich pozycje.

4) Dodaj 50 µl próbki lub roztworu wzorcowego do oddzielnych duplikatów dołków;dodać 50ul koniugatu enzymu, a następnie 50ul roztworu roboczego przeciwciała do każdego dołka, delikatnie wymieszać przez ręczne wytrząsanie płytki.Uszczelnij mikropłytkę membraną przykrywającą i inkubuj w 25 ℃ przez 30 min.

5) Wylać płyn z mikrostudzienki, klapki do wyschnięcia na bibule chłonnej, dodać 250 µl/studzienkę buforu do płukania do płukania mikropłytki przez 15-30s, następnie wyjąć i osuszyć klapką papierem chłonnym, powtórzyć 4-5 razy.(Jeśli po trzepotaniu są bąbelki, pokrój je czystymi końcówkami).

6) Barwienie: dodaj 50 µl substratu A, a następnie 50 µl substratu B do każdego dołka.Delikatnie wymieszać przez ręczne potrząsanie płytką, a następnie inkubować w 25 ℃ przez 15 min w ciemności w celu zabarwienia.

7) Oznaczanie: dodać 50 µl roztworu zatrzymującego reakcję do każdego dołka.Delikatnie wymieszać przez ręczne potrząsanie płytką.Ustaw długość fali czytnika mikropłytek na 450 nm, aby określić wartość OD każdego dołka.(Zalecamy odczytanie wartości OD przy podwójnej długości fali 450/630nm w ciągu 5 minut).

 

7. Ocena wyniku

 

Istnieją dwie metody oceny wyników: pierwsza to ocena zgrubna, a druga to określenie ilościowe.Zauważ, że wartość OD próbki ma ujemną korelację z zawartością AHD.

7.1 Ocena jakościowa

Zakres stężeń (ng/mL) można uzyskać porównując średnią wartość OD próbki z wartością roztworu wzorcowego.Zakładając, że wartość OD próbkiⅠ wynosi 0,3, a próbkiⅡ 1,0 ppb, wartość OD roztworów wzorcowych wynosi: 2,243 dla 0 ppb, 1,816 dla 0,04 ppb, 1,415 dla 0,12 ppb, 0,74 dla 0,36 ppb, 0,313 dla 1,08 ppb, 0,155 dla 3,24 ppb, odpowiednio zakres stężeń próbkiⅠ wynosi 1,08 do 3,24 ppb, a próbkiⅡ 0,12 do 0,36 ppb.

7.2 Oznaczenie ilościowe

Średnie wartości absorbancji otrzymuje się dla średniej wartości OD (B) próbki i roztworu wzorcowego podzielonej przez wartość OD (B0) pierwszego roztworu wzorcowego (0 wzorzec), a następnie mnożone przez 100%, czyli ,

Procent wartości absorbancji =	B	×100%
	B0

B—średnia (podwójne studzienki) wartość OD próbki lub roztworu wzorcowego

B0 — średnia wartość OD roztworu wzorcowego 0 ng/mL

Narysuj krzywą standardową z procentami absorpcji roztworu wzorcowego i wartościami półlogarytmu roztworu wzorcowego AHD (ng/mL) odpowiednio na osiach Y i X.Odczytaj odpowiednie stężenie próbki z krzywej standardowej, włączając jej procent absorpcji do krzywej standardowej.Otrzymana wartość jest następnie mnożona przez odpowiednią krotność rozcieńczenia, uzyskując ostatecznie stężenie AHD w próbce.

 

8. Środki ostrożności

 

1) Temperatura pokojowa jest niższa niż 25℃ lub temperatura odczynnika i próbki nie są przywrócone do temperatury pokojowej (20-25℃), co spowoduje spadek standardowej wartości OD.

2) Podczas procesu mycia suszeniu mikropłytki będzie towarzyszyć nieliniowość krzywej standardowej i niezadowalająca odtwarzalność;dlatego przejdź do następnego kroku natychmiast po umyciu.

3) Dobrze wymieszaj, w przeciwnym razie będzie słaba odtwarzalność.

4) Roztwór zatrzymujący to 2 M roztwór kwasu siarkowego, unikać kontaktu ze skórą.

5) Nie używaj zestawu po upływie terminu ważności.Użycie rozcieńczonych lub zafałszowanych odczynników z zestawu może spowodować zmiany czułości i wykrywanych wartości OD.Nie należy wymieniać odczynników w różnych partiach zestawów.

6) Zamknąć ponownie nieużywane mikropłytki w samouszczelniających się torebkach.Standardowe roztwory i bezbarwne łączniki są wrażliwe na światło i nie mogą być bezpośrednio wystawione na działanie światła.

7) Wyrzucić każdy roztwór barwiący, którego kolor wskazuje, że roztwór uległ degradacji.Wartość wykrywania mniejsza niż 0,5 dla roztworu wzorcowego 1 (0 ppb) wskazuje na degradację.

8) Optymalna temperatura reakcji wynosi 25 ℃, a czułość wykrywania i wartość OD zmienią się, jeśli temperatura będzie zbyt wysoka lub zbyt niska.

 

9. Przechowywanie i data ważności

 

Przechowywanie: przechowywać w temperaturze od 2 do 8 ℃, nie zamrażać.

Termin ważności: 12 miesięcy;data produkcji znajduje się na pudełku.

Uwaga: Jeśli opakowanie próżniowe mikropłytki przecieka, nadal można go używać, nie wpływaj na wynik testu, zrelaksuj się podczas użytkowania.

 

 

P1: Kiedy zostanie wysłany?
A1: Wyślemy towar tak szybko, jak to możliwe w ciągu 7 dni roboczych od otrzymania płatności.(W przypadku epidemii i innych czynników zewnętrznych mogą wystąpić opóźnienia w wysyłce)

 

P2: czy obsługuje OEM/ODM?
A2: Może być obsługiwany, ale określona ilość musi przekraczać 100 000 sztuk, aby ułatwić niestandardowe produkty.

 

P3: Jak radzi sobie twoja fabryka pod względem kontroli jakości?
A3: Posiadamy certyfikaty ISO9001 i ISO13485 wydane przez państwo.Nasz proces produkcyjny jest zgodny ze standardowym procesem, co może zapewnić optymalną jakość produktów.

 

P4: Jak świadczona jest obsługa posprzedażna?
A4: Zapewniamy profesjonalną techniczną obsługę posprzedażną online.Możemy zapewnić Ci indywidualne wskazówki w formie wideo, rozmów telefonicznych itp.

 

P5: Jaka jest metoda płatności?
A5: Otrzymujemy płatność przez T / T.

 

P6: jak wysłać?
A6: Uzyskując oferty od naszych wielu współpracujących przewoźników, wybierz najlepszy sposób wysyłki lub możesz wysłać zgodnie ze swoimi wymaganiami.