Nitrofuran AOZ Kit Test ELISA dla czułości miodu z krewetek rybnych 0,01 ppb 96 studzienek / zestaw

Zestaw testowy Nitrofuran AOZ ELISA do czułości na miód z krewetek rybnych 0,01 ppb 96 studzienek / zestaw

 

1. Zasada

To fzestaw do szybkiego testowania bezpieczeństwaopiera się na kompetycyjnym teście immunoenzymatycznym do wykrywania AOZ w próbce.Antygeny sprzęgające są wstępnie powlekane na paskach mikrostudzienek.AOZ w próbce i antygeny sprzęgające wstępnie pokryte na paskach mikrostudzienek konkurują o przeciwciała przeciwko AOZ.Po dodaniu koniugatu enzymu dodaje się substrat TMB w celu zabarwienia.Wartość gęstości optycznej (OD) próbki ma ujemną korelację z zawartym w niej AOZ.Wartość tę porównuje się z krzywą standardową, a następnie uzyskuje się stężenie AOZ.

2. Komponenty

1	Paski z mikrodołkami	12 pasków z 8 wyjmowanymi studnie każdy
2	6× roztwór wzorcowy (po 1 ml)	0ppb	0,01 ppb
		0,03 ppb	0,09 ppb
		0,27 ppb	0,81 ppb
3	Koniugat enzymatyczny	7ml	czerwona czapka
4	Roztwór roboczy przeciwciał	7ml	niebieska czapka
5	Podłoże A	7ml	Biała czapka
6	Podłoże B	7ml	czarna czapka
7	Zatrzymaj rozwiązanie	7ml	żółta czapka
8	20× skoncentrowany bufor do płukania	40ml	Biała czapka
9	2× stężony roztwór do ponownego rozpuszczania	50ml	przezroczysta czapka
10	Aldehyd 2-nitrobenzowy (C7H5NO3)	10ml	czarna czapka

 

3. Specyfikacje techniczne

Czułość: 0,01 ppb

Temperatura inkubacji: 25 ℃

Czas inkubacji: 30 min ～ 15 min

Granica wykrywalności

Tkanka, jajko, miód: 0,05 ppb

Wskaźnik reakcji krzyżowej

100%

AMOZ <0,1%

AHD <0,1%

SEM <0,1%

Wskaźnik odzysku

Tkanka, jajko 95±25%

Miód 85±23%

 

4. Materiały wymagane, ale niedostarczone

1) Wyposażenie: czytnik mikropłytek, drukarka, homogenizator, urządzenie do suszenia azotem, wir, wirówka, pipety pomiarowe, waga (odwrotność 0,01 g), inkubator, łaźnia wodna;

2) Mikropipety: jednokanałowe 20-200 µl, 100-1000 µl i wielokanałowe 30～300 µl;

3) Odczynniki: NaOH, octan etylu, n-Heksan, HCl (ok. 36,5%), K2HPO4·3H2O

 

5. Wstępna obróbka próbki

Instrukcje

Przed wstępną obróbką jakiejkolwiek próbki należy uwzględnić następujące punkty:

1) Do eksperymentów można używać tylko jednorazowych końcówek, które należy wymieniać, gdy są używane do pochłaniania różnych odczynników;

2) Przed eksperymentem każdy sprzęt doświadczalny musi być czysty i powinien zostać ponownie oczyszczony w razie potrzeby, aby uniknąć zanieczyszczenia, które zakłóca wyniki eksperymentu.

Przygotowanie roztworu przed wstępną obróbką próbki:

1) 0,1 M K2HPO4: rozpuścić 11,4 g K2HPO4·3H2O w wodzie dejonizowanej do 500 ml.

2) 1 M HCl: rozpuść 8,6 ml HCl (około 36,5%) w wodzie dejonizowanej do 100 ml.

3) 1 M NaOH: rozpuścić 4 g NaOH w dejonizowanej wodzie do 100 ml.

4) 2 x stężony roztwór do ponownego rozpuszczania rozcieńcza się wodą dejonizowaną w stosunku 1:1 (1 ml stężonego roztworu do ponownego rozpuszczania + 1 ml wody dejonizowanej), stosowanej do ponownego rozpuszczania próbki.

 

5.1 Przygotowanie próbek

a)Tkanka, jajko

1) Odważyć 1 ± 0,05 g homogenizowanej próbki, dodać 4 ml wody destylowanej, 0,5 ml 1 M HCl i 100 ul 2-nitrobenzaldehydu (C7H5NO3) do każdej probówki, wstrząsać prawidłowo przez 2 min;.

2) Inkubować w temperaturze 37 ℃ przez noc (około 16 godzin) lub inkubować w temperaturze 56 ℃ w łaźni wodnej (2 godziny).

3) Dodaj 5 ml 0,1 M K2HPO4, 0,4 ml 1 M NaOH i 6 ml octanu etylu do każdej probówki, wytrząsaj przez 30s.

4) Wiruj z prędkością powyżej 4000r/min w temperaturze pokojowej (20-25 ℃) przez 10 min (jeśli występuje emulsyfikacja lub warstwa octanu etylu nie wystarcza na 3 ml, inkubuj próbkę w 80 ℃ łaźni wodnej przez 10 min i wiruj wielokrotnie; lub zwiększ prędkość i wydłużyć czas wirowania).

5) Przenieś 3mL warstwy octanu etylu do nowej probówki wirówkowej i odparuj do sucha azotem lub powietrzem w 50℃.

6) Rozpuścić suche pozostałości w 2mL N-heksanu, dodać 1mL rozcieńczonego roztworu do ponownego rozpuszczania, prawidłowo mieszać przez 30 sekund, wirować z prędkością powyżej 4000 obr/min w temperaturze pokojowej (20-25℃) przez 10 min;Usunąć górną warstwę N-heksanową (jeśli występuje emulgacja, po usunięciu górnej warstwy N-heksanowej fazy inkubować próbkę w 70℃ łaźni wodnej przez 10-20 min, wielokrotnie wirować).

7) Wziąć 50 µL dolnego do analizy.

Krotność rozcieńczenia próbki: 2

 

b) Miód

1) Odważyć 2± 0,05 g homogenizowanej próbki (miód), dodać 4 ml wody destylowanej, 0,5 ml 1 M HCl i 100 µl 2-nitrobenzaldehydu (C7H5NO3) do każdej probówki, prawidłowo wstrząsać przez 2 min;.

2) Inkubować w temperaturze 37 ℃ przez noc (około 16 godzin) lub inkubować w temperaturze 56 ℃ w łaźni wodnej (2 godziny).

3) Dodaj 5 ml 0,1 M K2HPO4, 0,4 ml 1 M NaOH i 6 ml octanu etylu do każdej probówki, wytrząsaj przez 30s.

4) Wiruj z prędkością powyżej 4000r/min w temperaturze pokojowej (20-25℃) przez 10min (jeśli występuje emulsyfikacja lub warstwa octanu etylu nie wystarcza na 3ml, inkubuj próbkę w 80℃ łaźni wodnej przez 10min i wiruj wielokrotnie; lub zwiększ prędkość i wydłużyć czas wirowania).

5) Przenieś 3mL warstwy octanu etylu do nowej probówki wirówkowej i odparuj do sucha azotem lub powietrzem w 50℃.

6) Rozpuścić suche pozostałości w 2mL N-heksanu, dodać 1mL rozcieńczonego roztworu do ponownego rozpuszczania, prawidłowo mieszać przez 30 sekund, wirować z prędkością powyżej 4000r/min w temperaturze pokojowej (20-25℃) przez 10 min;Usunąć górną warstwę N-heksanową (jeśli występuje emulgacja, po usunięciu górnej warstwy N-heksanowej fazy inkubować próbkę w 70℃ łaźni wodnej przez 10-20 min, wielokrotnie wirować).

7) Wziąć 50 µL dolnego do analizy.

Krotność rozcieńczenia próbki:1

 

6. Procedury ELISA

6,1 Instrukcje

1) Przed użyciem wszystkie odczynniki i paski z mikrostudzienkami należy doprowadzić do temperatury pokojowej (20-25 ℃);

2) Przywróć wszystkie odczynniki do 2-8 ℃ natychmiast po użyciu;

3) Powtarzalność analizy ELISA w dużym stopniu zależy od konsystencji płukania płytek.Prawidłowe działanie mycia płyt jest kluczowym punktem w procedurach ELISA;

4) W przypadku inkubacji w stałych temperaturach wszystkie próbki i odczynniki muszą unikać ekspozycji na światło, a każda mikropłytka powinna być uszczelniona membraną przykrywającą.

 

6,2 Procedury operacyjne

1)Doprowadzić zestaw testowy do temperatury pokojowej (20-25 ℃) na co najmniej 30 minut, pamiętać, że każdy odczynnik musi być wstrząsany, aby równomiernie wymieszać przed użyciem, umieścić wymagane paski z mikrostudzienkami w ramkach płytek.Ponownie zamknij nieużywaną mikropłytkę, przechowuj w temperaturze 2-8 ℃, nie zamrażaj.

2)Przygotowanie roztworu: rozcieńczyć 40 ml 20 × stężonego buforu do płukania wodą dejonizowaną w stosunku 1:19 (1 część 20 × stężony bufor do płukania + 19 części wody dejonizowanej).Lub przygotuj w razie potrzeby..

3)Numeracja: ponumeruj mikrostudzienki według próbek i roztworu wzorcowego;każda próbka i roztwór wzorcowy powinny być wykonane w dwóch egzemplarzach, zanotować ich pozycje.

4)Dodać 50 µl próbki lub roztworu wzorcowego do oddzielnych dołków zduplikowanych;dodać 50 µl koniugatu enzymu, a następnie 50 µl roztworu roboczego przeciwciała do każdego dołka, delikatnie wymieszać przez ręczne wytrząsanie płytki.Uszczelnij mikropłytkę membraną przykrywającą i inkubuj w 25 ℃ przez 30 min.

5)Wylać płyn z mikrostudzienki, klapki do wyschnięcia na bibule chłonnej, dodać 250 µl/studzienkę buforu do płukania do płukania mikropłytki przez 15-30 s, następnie wyjąć i osuszyć klapką papierem chłonnym, powtórzyć 4-5 razy.(Jeśli po trzepotaniu są bąbelki, pokrój je czystymi końcówkami).

6)Zabarwienie: dodać 50 µl substratu A, a następnie 50 µl substratu B do każdego dołka.Delikatnie wymieszać przez ręczne potrząsanie płytką, a następnie inkubować w 25 ℃ przez 15 min w ciemności w celu zabarwienia.

7)Oznaczanie: dodać 50 µl roztworu zatrzymującego reakcję do każdego dołka.Delikatnie wymieszać przez ręczne potrząsanie płytką.Ustaw długość fali czytnika mikropłytek na 450 nm, aby określić wartość OD każdego dołka.(Zalecamy odczytanie wartości OD przy podwójnej długości fali 450/630nm w ciągu 5 minut).

 

7. Ocena wyniku

Istnieją dwie metody oceny wyników: pierwsza to ocena zgrubna, a druga to określenie ilościowe.Zauważ, że wartość OD próbki ma ujemną korelację ze stężeniem AOZ.

7.1 Ocena jakościowa

Zakres stężeń (ng/mL) AOZ można uzyskać porównując średnią wartość OD próbki z wartością roztworu wzorcowego.Zakładając, że wartość OD próbkiⅠ wynosi 0,3, a próbkiⅡ wynosi 1,0, wartość OD roztworów wzorcowych wynosi: 2,243 dla 0 ppb, 1,816 dla 0,01 ppb, 1,415 dla 0,03 ppb, 0,74 dla 0,09 ppb, 0,313 dla 0,27 ppb 0,155 dla 0,81 ppb, odpowiednio zakres stężeń próbkiⅠ wynosi 0,27 ppb do 0,81 ppb, a próbkiⅡ wynosi 0,03 ppb do 0,09 ppb.

7.2 Oznaczenie ilościowe

Średnie wartości absorbancji otrzymuje się dla średniej wartości OD (B) próbki i roztworu wzorcowego podzielonej przez wartość OD (B0) pierwszego roztworu wzorcowego (0 wzorzec), a następnie mnożone przez 100%, czyli ,

 

Procent wartości absorbancji =	B	×100%
	B0

 

B — średnia wartość OD próbki lub roztworu wzorcowego

B0 — średnia wartość OD roztworu wzorcowego 0 ng/mL

Narysuj krzywą standardową z procentami absorpcji roztworu wzorcowego i wartościami półlogarytmu roztworu wzorcowego AOZ (ng/mL) odpowiednio na osiach Y i X.Odczytaj odpowiednie stężenie próbki z krzywej standardowej, włączając jej procent absorpcji do krzywej standardowej.Otrzymaną wartość mnoży się następnie przez odpowiednią krotność rozcieńczenia, uzyskując ostatecznie stężenie AOZ w próbce.

 

8. Środki ostrożności

1)Temperatura pokojowa poniżej 25 ℃ lub temperatura odczynników i próbek nie przywróconych do temperatury pokojowej (20-25 ℃) doprowadzi do niższej standardowej wartości OD.

2)Suchości mikropłytki w procesie mycia będą towarzyszyć sytuacje, w tym nieliniowe krzywe wzorcowe i niepożądana odtwarzalność;Więc przejdź do następnego kroku natychmiast po umyciu.

3)Mieszaj równomiernie, w przeciwnym razie wystąpi niepożądana powtarzalność.

4)Rozwiązaniem zatrzymującym jest 2 M roztwór kwasu siarkowego, unikaj kontaktu ze skórą.

5)Nie używać zestawu po upływie terminu ważności.Użycie rozcieńczonych lub zafałszowanych odczynników z zestawów spowoduje zmiany czułości i wykrywanych wartości OD.Nie należy wymieniać odczynników z zestawów z różnych partii, które mają być używane.

6)Włóż niewykorzystaną mikropłytkę do samouszczelniającego się worka, aby ponownie ją zamknąć.Standardowy roztwór i bezbarwny środek barwiący są wrażliwe na światło, a zatem nie mogą być bezpośrednio wystawione na działanie światła.

7)Wyrzuć roztwór barwiący o dowolnym kolorze, który wskazuje na degenerację tego roztworu.Wartość wykrywania roztworu wzorcowego 1 (0 ppb) mniejsza niż 0,5 wskazuje na jego degenerację.

8)Optymalna temperatura reakcji to 25 ℃, a zbyt wysoka lub zbyt niska temperatura spowoduje zmiany czułości wykrywania i wartości OD.

 

9. Przechowywanie i data ważności

Przechowywanie: przechowywać w temperaturze 2-8 ℃, nie zamrażać.

Termin ważności: 12 miesięcy;data produkcji znajduje się na pudełku.

Uwaga: Jeśli opakowanie próżniowe mikropłytki przecieka, nadal można go używać, nie wpływaj na wynik testu, zrelaksuj się podczas użytkowania.

 

 

P1: Ile czasu zajmie wysyłka?
A1: Zazwyczaj wysyłamy w ciągu 7 dni roboczych.

 

P2: Czy wspierasz OEM/ODM?
A2: może być obsługiwany.Możemy dostosować się do Twoich konkretnych potrzeb i określonych ilości.

 

P3: Jak radzi sobie twoja fabryka pod względem kontroli jakości?
A3: Posiadamy certyfikat ISO9001 i certyfikat ISO13485, do tej pory cały proces produkcji, mamy standardowe zasady, przestrzegamy odpowiednich zachowań i przepisów rządu.

 

P4: Czy gwarantowana jest obsługa posprzedażna?
A4: Zapewniamy profesjonalną techniczną obsługę posprzedażną online.Jeśli produkt ulegnie awarii podczas eksperymentu, możemy zapewnić
indywidualne wskazówki przez telefon, wideo i inne formy.

 

P5: Jaka jest minimalna ilość zamówienia?
A5: 1Kit.

 

P6: Jaka jest metoda wysyłki?
A6: Może być wysyłany ekspresowo (FEDEX, UPS, DHL, EMS itp.) Lub drogą lotniczą i naziemną. Przed złożeniem zamówienia prosimy o potwierdzenie.