Nitrofuran AMOZ ELISA Zestaw szybkiego testu bezpieczeństwa żywności dla wrażliwości na mleko 0,03 ppb 96 studzienek / zestaw

Nitrofuran AMOZ ELISA Zestaw testowy bezpieczeństwa żywności dla wrażliwości na mleko 0,03 ppb 96 studzienek / zestaw

 

1.Zestaw testowy bezpieczeństwa żywności Nitrofuran AMOZ ELISAZasada

 

Ten zestaw do wykrywania jest oparty na kompetycyjnym teście immunoenzymatycznym do wykrywania AMOZ w próbkach.Sprzężone antygeny są wstępnie powlekane na paskach z mikrostudzienkami.AMOZ w próbce konkuruje ze sprzężonym antygenem wstępnie pokrytym na pasku z mikrostudzienkami o przeciwciało anty-AMOZ.Po dodaniu koniugatu enzymu dodaje się substrat TMB do barwienia.Wartość gęstości optycznej (OD) próbki jest ujemnie skorelowana z zawartym w niej AMOZ.Wartość tę porównuje się z krzywą standardową, a następnie uzyskuje się stężenie AMOZ.

 

2. Specyfikacje techniczne

 

Czułość: 0,03 ppb

Temperatura inkubacji: 25 ℃

Czas inkubacji: 30 min ～ 15 min

Granica wykrywalności Tkanka, jajko, miód: 0,1 ppb

Wskaźnik reakcji krzyżowej

100%

AHD < 0,1%

AOZ < 0,1%

SEM < 0,1%

Wskaźnik odzysku

Tkanka 80 ± 25%

Miód 75 ± 25%

Jajko 95 ± 25%

 

3.Zestaw testowy bezpieczeństwa żywności Nitrofuran AMOZ ELISAskładniki

 

1	Paski z mikrodołkami	12 pasków z 8 wyjmowanymi studnie każdy
2	6× roztwór wzorcowy (po 1 ml)	0ppb	0,03 ppb
		0,09 ppb	0,27 ppb
		0,81 ppb	2,43 ppb
3	Koniugat enzymatyczny	7ml	czerwona czapka
4	Roztwór roboczy przeciwciał	7ml	niebieska czapka
5	Podłoże A	7ml	Biała czapka
6	Podłoże B	7ml	czarna czapka
7	Zatrzymaj rozwiązanie	7ml	żółta czapka
8	20× skoncentrowany bufor do płukania	40ml	Biała czapka
9	2× stężony roztwór do ponownego rozpuszczania	50ml	przezroczysta czapka
10	Aldehyd 2-nitrobenzowy (C7H5NO3)	Aldehyd 2-nitrobenzowy (C7H5NO3)	Aldehyd 2-nitrobenzowy (C7H5NO3)

 

4. Materiały wymagane, ale niedostarczone

 

1) Wyposażenie: czytnik mikropłytek, drukarka, homogenizator, suszarka azotowa, wirówka, wirówka, rurka pomiarowa, waga (odwrotność 0,01 g), inkubator, łaźnia wodna;

2) Mikropipeta: jednokanałowa 20-200 µl, 100-1000 µl, wielokanałowa 30-300 µl;

3) Odczynniki: NaOH, octan etylu, n-heksan, HCl (około 36,5%), K2HPO4 3H2O.

 

5. Wstępna obróbka próbki

 

pouczać

Przed jakąkolwiek obróbką wstępną próbki należy uwzględnić następujące punkty:

1) W eksperymencie można używać wyłącznie jednorazowych końcówek, które należy wymieniać podczas pobierania różnych odczynników;

2) Przed eksperymentem sprzęt doświadczalny musi zostać wyczyszczony i ponownie oczyszczony, jeśli to konieczne, aby uniknąć zanieczyszczenia zakłócającego wyniki eksperymentu.

Przygotowanie roztworu przed wstępną obróbką próbki:

1) 0,1 M K2HPO4: Rozpuść 11,4 g K2HPO4·3H2O w wodzie dejonizowanej do 500 ml.

2) 1 M HCl: Rozpuść 8,6 ml HCl (około 36,5%) w dejonizowanej wodzie do 100 ml.

3) 1 M NaOH: Rozpuść 4 g NaOH w dejonizowanej wodzie do 100 ml.

4) Rozcieńczyć 2x stężony roztwór do ponownego rozpuszczania wodą dejonizowaną w stosunku 1:1 (1 ml stężonego roztworu do ponownego rozpuszczania + 1 ml wody dejonizowanej) w celu ponownego rozpuszczenia próbki.

 

5.1 Przygotowanie próbek

a) Tkanka, jajko

1) Odważyć 1 ± 0,05 g homogenizowanej próbki, dodać 4 ml wody destylowanej, 0,5 ml 1 M HCl i 100 ul 2-nitrobenzaldehydu (C7H5NO3) do każdej probówki, wstrząsać prawidłowo przez 2 min;.

2) Inkubować w temperaturze 37 ℃ przez noc (około 16 godzin) lub inkubować w temperaturze 56 ℃ w łaźni wodnej (2 godziny).

3) Dodaj 5 ml 0,1 M K2HPO4, 0,4 ml 1 M NaOH i 6 ml octanu etylu do każdej probówki, wytrząsaj przez 30s.

4) Wiruj z prędkością powyżej 4000r/min w temperaturze pokojowej (20-25 ℃) przez 10 min (jeśli występuje emulsyfikacja lub warstwa octanu etylu nie wystarcza na 3 ml, inkubuj próbkę w 80 ℃ łaźni wodnej przez 10 min i wiruj wielokrotnie; lub zwiększ prędkość i wydłużyć czas wirowania).

5) Przenieś 3mL warstwy octanu etylu do nowej probówki wirówkowej i odparuj do sucha azotem lub powietrzem w 50℃.

6) Rozpuścić suche pozostałości w 2mL N-heksanu, dodać 1mL rozcieńczonego roztworu do ponownego rozpuszczania, prawidłowo mieszać przez 30 sekund, wirować z prędkością powyżej 4000 obr/min w temperaturze pokojowej (20-25℃) przez 10 min;Usunąć górną warstwę N-heksanową (jeśli występuje emulgacja, po usunięciu górnej warstwy N-heksanowej fazy inkubować próbkę w 70℃ łaźni wodnej przez 10-20 min, wielokrotnie wirować).

7) Wziąć 50 µL dolnego do analizy.

Krotność rozcieńczenia próbki: 2

b) Miód

1) Odważyć 2± 0,05 g homogenizowanej próbki (miód), dodać 4 ml wody destylowanej, 0,5 ml 1 M HCl i 100 µl 2-nitrobenzaldehydu (C7H5NO3) do każdej probówki, prawidłowo wstrząsać przez 2 min;.

2) Inkubować w temperaturze 37 ℃ przez noc (około 16 godzin) lub inkubować w temperaturze 56 ℃ w łaźni wodnej (2 godziny).

3) Dodaj 5 ml 0,1 M K2HPO4, 0,4 ml 1 M NaOH i 6 ml octanu etylu do każdej probówki, wytrząsaj przez 30s.

4) Wiruj z prędkością powyżej 4000r/min w temperaturze pokojowej (20-25℃) przez 10min (jeśli występuje emulsyfikacja lub warstwa octanu etylu nie wystarcza na 3ml, inkubuj próbkę w 80℃ łaźni wodnej przez 10min i wiruj wielokrotnie; lub zwiększ prędkość i wydłużyć czas wirowania).

5) Przenieś 3mL warstwy octanu etylu do nowej probówki wirówkowej i odparuj do sucha azotem lub powietrzem w 50℃.

6) Rozpuścić suche pozostałości w 2mL N-heksanu, dodać 1mL rozcieńczonego roztworu do ponownego rozpuszczania, prawidłowo mieszać przez 30 sekund, wirować z prędkością powyżej 4000r/min w temperaturze pokojowej (20-25℃) przez 10 min;Usunąć górną warstwę N-heksanową (jeśli występuje emulgacja, po usunięciu górnej warstwy N-heksanowej fazy inkubować próbkę w 70℃ łaźni wodnej przez 10-20 min, wielokrotnie wirować).

7) Wziąć 50 µL dolnego do analizy.

Krotność rozcieńczenia próbki:1

 

6. Procedury ELISA

 

6.1 Instrukcje

1) Przed użyciem wszystkie odczynniki i paski z mikrostudzienkami należy doprowadzić do temperatury pokojowej (20-25 ℃);

2) Przywróć wszystkie odczynniki do 2-8 ℃ natychmiast po użyciu;

3) Powtarzalność analizy ELISA w dużym stopniu zależy od konsystencji płukania płytek.Prawidłowe działanie mycia płyt jest kluczowym punktem w procedurach ELISA;

4) W przypadku inkubacji w stałych temperaturach wszystkie próbki i odczynniki muszą unikać ekspozycji na światło, a każda mikropłytka powinna być uszczelniona membraną przykrywającą.

6.2 Procedury operacyjne

1) Doprowadź zestaw testowy do temperatury pokojowej (20-25 ℃) na co najmniej 30 minut, pamiętaj, że każdy odczynnik musi być wstrząsany, aby równomiernie wymieszać przed użyciem, umieść wymagane paski z mikrostudzienkami w ramkach płytek.Ponownie zamknij nieużywaną mikropłytkę, przechowuj w temperaturze 2-8 ℃, nie zamrażaj.

2) Przygotowanie roztworu: rozcieńczyć 40 ml 20 × stężonego buforu do płukania wodą dejonizowaną w stosunku 1:19 (1 część 20 × stężony bufor do płukania + 19 części wody dejonizowanej).Lub przygotuj w razie potrzeby.

3) Numeracja: ponumeruj mikrostudzienki według próbek i roztworu wzorcowego;każda próbka i roztwór wzorcowy powinny być wykonane w dwóch egzemplarzach, zanotować ich pozycje.

4) Dodaj 50 µl próbki lub roztworu wzorcowego do oddzielnych duplikatów dołków;dodać 50ul koniugatu enzymu, a następnie 50ul roztworu roboczego przeciwciała do każdego dołka, delikatnie wymieszać przez ręczne wytrząsanie płytki.Uszczelnij mikropłytkę membraną przykrywającą i inkubuj w 25 ℃ przez 30 min.

5) Wylać płyn z mikrostudzienki, klapką do wyschnięcia na bibule chłonnej, dodać 250 µl/studzienkę buforu do płukania, aby przemyć mikropłytkę przez 15-30s, następnie wyjąć i osuszyć klapką papierem chłonnym, powtórzyć 4-5 razy.(Jeśli po trzepotaniu są bąbelki, pokrój je czystymi końcówkami).

6) Zabarwienie: dodaj 50 µl substratu A, a następnie 50 µl substratu B do każdego dołka.Delikatnie wymieszać przez ręczne potrząsanie płytką, a następnie inkubować w 25 ℃ przez 15 min w ciemności w celu zabarwienia.

7) Oznaczanie: dodać 50 µl roztworu zatrzymującego reakcję do każdego dołka.Delikatnie wymieszać przez ręczne potrząsanie płytką.Ustaw długość fali czytnika mikropłytek na 450 nm, aby określić wartość OD każdego dołka.(Zalecamy odczytanie wartości OD przy podwójnej długości fali 450/630nm w ciągu 5 minut).

 

7. Ocena wyniku

 

Istnieją dwie metody oceny wyników: pierwsza to ocena zgrubna, a druga to określenie ilościowe.Należy zauważyć, że wartość OD próbki ma ujemną korelację ze stężeniem AMOZ.

7.1 Ocena jakościowa

Zakres stężeń (ng/mL) AMOZ można uzyskać porównując średnią wartość OD próbki z wartością roztworu wzorcowego.Zakładając, że wartość OD próbkiⅠ wynosi 0,3, a próbkiⅡ wynosi 1,0, wartość OD roztworów wzorcowych wynosi: 2,243 dla 0ppb, 1,816 dla 0,03ppb, 1,415 dla 0,09ppb, 0,74 dla 0,27ppb, 0,313 dla 0,81ppb 0,155 dla 2,43 ppb, odpowiednio zakres stężeń próbkiⅠ wynosi 0,81 do 2,43 ppb, a próbkiⅡ wynosi 0,09 do 0,27 ppb.

7.2 Oznaczenie ilościowe

Średnie wartości absorbancji otrzymuje się dla średniej wartości OD (B) próbki i roztworu wzorcowego podzielonej przez wartość OD (B0) pierwszego roztworu wzorcowego (0 wzorzec), a następnie mnożone przez 100%, czyli ,

Procent wartości absorbancji =	B	×100%
	B0

B — średnia wartość OD próbki lub roztworu wzorcowego

B0 — średnia wartość OD roztworu wzorcowego 0 ng/mL

Narysuj krzywą standardową z procentami absorpcji roztworu wzorcowego i wartościami półlogarytmu roztworu wzorcowego AMOZ (ng/mL) odpowiednio na osiach Y i X.Odczytaj odpowiednie stężenie próbki z krzywej standardowej, włączając jej procent absorpcji do krzywej standardowej.Otrzymaną wartość mnoży się następnie przez odpowiednią krotność rozcieńczenia, uzyskując ostatecznie stężenie AMOZ w próbce.

 

8. Środki ostrożności

 

1) Jeśli temperatura pokojowa jest niższa niż 25℃ lub temperatura odczynnika i próbka nie powróci do temperatury pokojowej (20-25℃), standardowa wartość OD spadnie.

2) Podczas procesu mycia suszeniu mikropłytki będzie towarzyszyć nieliniowość krzywej standardowej, a odtwarzalność nie jest idealna;dlatego przejdź do następnego kroku natychmiast po umyciu.

3) Dobrze wymieszaj, w przeciwnym razie powtarzalność będzie słaba.

4) Roztwór zatrzymujący to 2 M roztwór kwasu siarkowego, unikaj kontaktu ze skórą.

5) Nie używaj zestawu po upływie okresu przydatności do spożycia.Użycie rozcieńczonych lub zafałszowanych odczynników z zestawu może spowodować zmiany czułości i wykrywanych wartości OD.Nie należy wymieniać odczynników w różnych partiach zestawów.

6) Zamknąć ponownie nieużywane mikropłytki w torebkach strunowych.Standardowe roztwory i bezbarwne łączniki są wrażliwe na światło i nie mogą być bezpośrednio wystawione na działanie światła.

7) Wyrzucić każdy roztwór barwiący, którego kolor wskazuje, że roztwór uległ degradacji.Wartość wykrywania mniejsza niż 0,5 dla Roztworu Standardowego 1 (0 ppb) wskazuje na degradację.

8) Optymalna temperatura reakcji wynosi 25 ℃, a czułość wykrywania i wartość OD zmienią się, jeśli temperatura będzie zbyt wysoka lub zbyt niska.

 

9. Przechowywanie i data ważności

 

Przechowywanie: przechowywać w temperaturze 2-8 ℃, nie zamrażać.

Termin ważności: 12 miesięcy;data produkcji znajduje się na pudełku.

Uwaga: Jeśli opakowanie próżniowe mikropłytki przecieka, nadal można go używać, nie wpływaj na wynik testu, zrelaksuj się podczas użytkowania.

 

 

P1: Kiedy zostanie wysłany?
A1: Wyślemy towar tak szybko, jak to możliwe w ciągu 7 dni roboczych od otrzymania płatności.(W przypadku czynników zewnętrznych, takich jak epidemia, dostawa może się opóźnić)

 

P2: czy obsługuje OEM/ODM?
A2: Może być obsługiwany, ale określona ilość musi przekraczać 100 000 sztuk, co jest wygodne w przypadku niestandardowych produktów.

 

P3: Jak radzi sobie twoja fabryka pod względem kontroli jakości?
A3: Posiadamy krajowe certyfikaty ISO9001 i ISO13485.Nasz proces produkcyjny jest zgodny ze standardowymi procedurami, aby zapewnić optymalną jakość produktu.

 

P4: Jak zapewnić obsługę posprzedażną?
A4: Zapewniamy profesjonalną techniczną obsługę posprzedażną online.Możemy zapewnić Ci indywidualne wskazówki za pośrednictwem wideo, telefonu itp.

 

P5: Jaka jest metoda płatności?
A5: Otrzymujemy płatność przez T / T.

 

P6: jak wysłać?
A6: Wybierz najlepszą dla siebie metodę wysyłki, otrzymując oferty od naszych wielu współpracujących przewoźników, a także wysyłaj zgodnie z własnymi wymaganiami.