Zestaw testowy bezpieczeństwa żywności Nitrofuran SEM ELISA do wrażliwości na mleko 0,02 ppb 96 studzienek / zestaw

Zestaw testowy bezpieczeństwa żywności Nitrofuran SEM ELISA dla wrażliwości na mleko 0,02 ppb 96 studzienek / zestaw

 

1. Zasada zestawu testów bezpieczeństwa żywności Nitrofuran SEM ELISA

 

Ten zestaw testowy jest oparty na kompetycyjnym teście immunoenzymatycznym do wykrywania nitrofuranu (SEM) w próbce.Antygeny sprzęgające są wstępnie powlekane na paskach mikrostudzienek.Nitrofuran (SEM) w próbce i antygeny sprzęgające wstępnie opłaszczone na paskach mikrostudzienek konkurują o przeciwciała anty-SEM.Po dodaniu koniugatu enzymu dodaje się substrat TMB w celu zabarwienia.Wartość gęstości optycznej (OD) próbki wykazuje ujemną korelację z zawartym w niej SEM.Wartość tę porównuje się z krzywą standardową, a następnie uzyskuje się stężenie SEM.

 

2. Specyfikacje techniczne

 

Czułość: 0,02ppb

Temperatura inkubacji: 25 ℃

Czas inkubacji: 30 min ～ 15 min

Granica wykrywalności Tkanka, jajko, miód: 0,1 ppb

Wskaźnik reakcji krzyżowej

SEM 100%

AMOZ < 0,1%

AOZ < 0,1%

AHD < 0,1%

Wskaźnik odzysku

Tkanka 75±25%

Miód 70±20%

Jajko 95±25%

 

3. Składniki zestawu do badania bezpieczeństwa żywności Nitrofuran SEM ELISA

 

1	Paski z mikrodołkami	12 pasków z 8 wyjmowanymi studnie każdy
2	6× roztwór wzorcowy (po 1 ml)	0ppb	0,02ppb
		0,06 ppb	0,18ppb
		0,54ppb	1,62 ppb
3	Koniugat enzymatyczny	7ml	czerwona czapka
4	Roztwór roboczy przeciwciał	7ml	niebieska czapka
5	Podłoże A	7ml	Biała czapka
6	Podłoże B	7ml	czarna czapka
7	Zatrzymaj rozwiązanie	7ml	żółta czapka
8	20× skoncentrowany bufor do płukania	40ml	Biała czapka
9	2× stężony roztwór do ponownego rozpuszczania	50ml	przezroczysta czapka
10	Aldehyd 2-nitrobenzowy (C7H5NO3)	10ml	czarna czapka

 

4. Materiały wymagane, ale niedostarczone

 

1) Wyposażenie: czytnik mikropłytek, drukarka, homogenizator, urządzenie do suszenia azotem, wir, wirówka, pipety pomiarowe, waga (odwrotność 0,01 g), inkubator, łaźnia wodna;

2) Mikropipety: jednokanałowe 20-200 µl, 100-1000 µl i wielokanałowe 30～300 µl;

3) Odczynniki: NaOH, octan etylu, n-Heksan, HCl (ok. 36,5%), K2HPO4·3H2O.

 

5. Wstępna obróbka próbki

 

Instrukcje

Przed wstępną obróbką jakiejkolwiek próbki należy uwzględnić następujące punkty:

1) Do eksperymentów można używać tylko jednorazowych końcówek, które należy wymieniać, gdy są używane do pochłaniania różnych odczynników;

2) Przed eksperymentem każdy sprzęt doświadczalny musi być czysty i powinien zostać ponownie oczyszczony w razie potrzeby, aby uniknąć zanieczyszczenia, które zakłóca wyniki eksperymentu.

Przygotowanie roztworu przed wstępną obróbką próbki:

1) 0,1 M K2HPO4: rozpuścić 11,4 g K2HPO4·3H2O w wodzie dejonizowanej do 500 ml.

2) 1 M HCl: rozpuść 8,6 ml HCl (około 36,5%) w wodzie dejonizowanej do 100 ml.

3) 1 M NaOH: rozpuścić 4 g NaOH w dejonizowanej wodzie do 100 ml.

4) 2 x stężony roztwór do ponownego rozpuszczania rozcieńcza się wodą dejonizowaną w stosunku 1:1 (1 ml stężonego roztworu do ponownego rozpuszczania + 1 ml wody dejonizowanej), stosowanej do ponownego rozpuszczania próbki.

 

5.1 Przygotowanie próbek

a) Tkanka, jajko

1) Odważyć 1 ± 0,05 g homogenizowanej próbki, dodać 4 ml wody destylowanej, 0,5 ml 1 M HCl i 100 ul 2-nitrobenzaldehydu (C7H5NO3) do każdej probówki, wstrząsać prawidłowo przez 2 min;.

2) Inkubować w temperaturze 37 ℃ przez noc (około 16 godzin) lub inkubować w temperaturze 56 ℃ w łaźni wodnej (2 godziny).

3) Dodaj 5 ml 0,1 M K2HPO4, 0,4 ml 1 M NaOH i 6 ml octanu etylu do każdej probówki, wytrząsaj przez 30s.

4) Wiruj z prędkością powyżej 4000r/min w temperaturze pokojowej (20-25 ℃) przez 10 min (jeśli występuje emulsyfikacja lub warstwa octanu etylu nie wystarcza na 3 ml, inkubuj próbkę w 80 ℃ łaźni wodnej przez 10 min i wiruj wielokrotnie; lub zwiększ prędkość i wydłużyć czas wirowania).

5) Przenieś 3mL warstwy octanu etylu do nowej probówki wirówkowej i odparuj do sucha azotem lub powietrzem w 50℃.

6) Rozpuścić suche pozostałości w 2mL N-heksanu, dodać 1mL rozcieńczonego roztworu do ponownego rozpuszczania, prawidłowo mieszać przez 30 sekund, wirować z prędkością powyżej 4000 obr/min w temperaturze pokojowej (20-25℃) przez 10 min;Usuń górną warstwę N-heksanową (jeśli występuje Emulsyfikacja, po usunięciu górnej warstwy N-heksanowej, inkubuj próbkę w 70℃ łaźni wodnej przez 10-20 min, wielokrotnie wiruj).

7) Wziąć 50 µL dolnego do analizy.

Krotność rozcieńczenia próbki: 2

b) Miód

1) Odważyć 2± 0,05 g homogenizowanej próbki (miód), dodać 4 ml wody destylowanej, 0,5 ml 1 M HCl i 100 µl 2-nitrobenzaldehydu (C7H5NO3) do każdej probówki, prawidłowo wstrząsać przez 2 min;.

2) Inkubować w temperaturze 37 ℃ przez noc (około 16 godzin) lub inkubować w temperaturze 56 ℃ w łaźni wodnej (2 godziny).

3) Dodaj 5 ml 0,1 M K2HPO4, 0,4 ml 1 M NaOH i 6 ml octanu etylu do każdej probówki, wytrząsaj przez 30s.

4) Wiruj z prędkością powyżej 4000r/min w temperaturze pokojowej (20-25℃) przez 10min (jeśli występuje emulsyfikacja lub warstwa octanu etylu nie wystarcza na 3ml, inkubuj próbkę w 80℃ łaźni wodnej przez 10min i wiruj wielokrotnie; lub zwiększ prędkość i wydłużyć czas wirowania).

5) Przenieś 3mL warstwy octanu etylu do nowej probówki wirówkowej i odparuj do sucha azotem lub powietrzem w 50℃.

6) Rozpuścić suche pozostałości w 2mL N-heksanu, dodać 1mL rozcieńczonego roztworu do ponownego rozpuszczania, prawidłowo mieszać przez 30 sekund, wirować z prędkością powyżej 4000r/min w temperaturze pokojowej (20-25℃) przez 10 min;Usuń górną warstwę N-heksanową (jeśli występuje Emulsyfikacja, po usunięciu górnej warstwy N-heksanowej, inkubuj próbkę w 70℃ łaźni wodnej przez 10-20 min, wielokrotnie wiruj).

7) Wziąć 50 µL dolnego do analizy.

Krotność rozcieńczenia próbki: 1

 

6. Procedury ELISA

 

6.1 Instrukcje

1) Przed użyciem wszystkie odczynniki i paski z mikrostudzienkami należy doprowadzić do temperatury pokojowej (20-25 ℃);

2) Przywróć wszystkie odczynniki do 2-8 ℃ natychmiast po użyciu;

3) Powtarzalność analizy ELISA w dużym stopniu zależy od konsystencji płukania płytek.Prawidłowe działanie mycia płyt jest kluczowym punktem w procedurach ELISA;

4) W przypadku inkubacji w stałych temperaturach wszystkie próbki i odczynniki muszą unikać ekspozycji na światło, a każda mikropłytka powinna być uszczelniona membraną przykrywającą.

 

6.2 Procedury operacyjne

1) Umieść zestaw w temperaturze pokojowej (20-25°C) na co najmniej 30 minut, pamiętając, że każdy odczynnik musi być dobrze wstrząśnięty i wymieszany przed użyciem, a następnie umieść wymagane paski z mikrostudzienkami w ramie płytki.Niezużyte mikropłytki należy ponownie zamknąć i przechowywać w temperaturze 2-8°C, nie zamrażać.

2) Przygotowanie roztworu: Weź 40 ml 20x stężonego buforu do płukania i rozcieńcz wodą dejonizowaną w stosunku 1:19 (1 część 20x stężonego buforu do płukania + 19 części wody dejonizowanej).Lub przygotuj w razie potrzeby.

3) Numeracja: Ponumeruj mikrostudzienki zgodnie z próbkami i roztworami wzorcowymi;każda próbka i roztwór wzorcowy powinny być wykonane w dwóch egzemplarzach, a ich pozycje powinny być odnotowane.

4) Dodaj 50 µl próbki lub roztworu wzorcowego do zduplikowanych dołków;dodać 50ul koniugatu enzymu do każdego dołka, następnie dodać 50ul roztworu roboczego przeciwciała i wstrząsnąć płytką, aby delikatnie wymieszać.Uszczelnij mikropłytkę folią przykrywającą i inkubuj w 25°C przez 30 min.

5) Wylać płyn z mikrostudzienek, osuszyć papierem absorbującym, dodać 250 µl/studzienkę buforu do płukania, aby przemyć płytkę z mikrostudzienkami przez 15-30 s, następnie wyjąć i osuszyć papierem chłonnym, powtórzyć 4-5 razy.(Jeśli po stuknięciu pojawią się pęcherzyki powietrza, odetnij je czystą końcówką).

6) Wywoływanie koloru: Dodaj 50 µL Substratu A i 50 µL Substratu B do każdego dołka.Wstrząsnąć płytką ręcznie, aby delikatnie wymieszać i inkubować w 25°C przez 15 min w ciemności w celu uzyskania koloru.

7) Test: Dodać 50 µl roztworu zatrzymującego reakcję do każdego dołka.Delikatnie wymieszaj, potrząsając płytką ręką.Ustaw długość fali czytnika mikropłytek na 450 nm, aby określić wartość OD każdego dołka.(Zaleca się odczytanie wartości OD przy podwójnej długości fali 450/630nm w ciągu 5 minut).

 

7. Ocena wyniku

 

Istnieją dwie metody oceny wyników: pierwsza to ocena zgrubna, a druga to określenie ilościowe.Należy zauważyć, że wartość OD próbki ma ujemną korelację z zawartością SEM.

7.1 Ocena jakościowa

Zakres stężeń (ng/mL) można uzyskać porównując średnią wartość OD próbki z wartością roztworu wzorcowego.Zakładając, że wartość OD próbkiⅠ wynosi 0,3, a próbkiⅡ 1,0 ppb, wartość OD roztworów wzorcowych wynosi: 2,243 dla 0 ppb, 1,816 dla 0,02 ppb, 1,415 dla 0,06 ppb, 0,74 dla 0,18 ppb, 0,313 dla 0,54 ppb, 0,155 dla 1,62 ppb, odpowiednio zakres stężeń próbkiⅠ wynosi 0,54 do 1,62 ppb, a próbkiⅡ wynosi 0,06 do 0,18 ppb.

7.2 Oznaczenie ilościowe

Średnie wartości absorbancji otrzymuje się dla średniej wartości OD (B) próbki i roztworu wzorcowego podzielonej przez wartość OD (B0) pierwszego roztworu wzorcowego (0 wzorzec), a następnie mnożone przez 100%, czyli ,

Procent wartości absorbancji =	B	×100%
	B0

B—średnia (podwójne studzienki) wartość OD próbki lub roztworu wzorcowego

B0 — średnia wartość OD roztworu wzorcowego 0 ng/mL

Narysuj krzywą standardową z procentami absorpcji roztworu wzorcowego i wartościami półlogarytmu standardowego roztworu SEM (ng/ml) odpowiednio na osiach Y i X.Odczytaj odpowiednie stężenie próbki z krzywej standardowej, włączając jej procent absorpcji do krzywej standardowej.Otrzymaną wartość mnoży się następnie przez odpowiednią krotność rozcieńczenia, uzyskując ostatecznie stężenie SEM w próbce.

 

8. Środki ostrożności

 

1) Jeśli temperatura pokojowa jest niższa niż 25℃ lub temperatura odczynnika i próbka nie powróci do temperatury pokojowej (20-25℃), standardowa wartość OD spadnie.

2) Podczas procesu mycia suszeniu mikropłytki będzie towarzyszyć nieliniowość krzywej standardowej, a odtwarzalność nie jest idealna;dlatego przejdź do następnego kroku natychmiast po umyciu.

3) Dobrze wymieszaj, w przeciwnym razie powtarzalność będzie słaba.

4) Roztwór zatrzymujący to 2 M roztwór kwasu siarkowego, unikaj kontaktu ze skórą.

5) Nie używaj zestawu po upływie okresu przydatności do spożycia.Użycie rozcieńczonych lub zafałszowanych odczynników z zestawu może spowodować zmiany czułości i wykrywanych wartości OD.Nie należy wymieniać odczynników w różnych partiach zestawów.

6) Zamknąć ponownie nieużywane mikropłytki w torebkach strunowych.Standardowe roztwory i bezbarwne łączniki są wrażliwe na światło i nie mogą być bezpośrednio wystawione na działanie światła.

7) Wyrzucić każdy roztwór barwiący, którego kolor wskazuje, że roztwór uległ degradacji.Wartość wykrywania mniejsza niż 0,5 dla Roztworu Standardowego 1 (0 ppb) wskazuje na degradację.

8) Optymalna temperatura reakcji wynosi 25 ℃, a czułość wykrywania i wartość OD zmienią się, jeśli temperatura będzie zbyt wysoka lub zbyt niska.

 

9. Przechowywanie i data ważności

 

Przechowywanie: Przechowywać w temperaturze 2-8°C, nie zamrażać.
Termin ważności: 12 miesięcy;data produkcji znajduje się na pudełku.
Uwaga: Jeśli opakowanie próżniowe mikropłytek przecieka, nadal można go używać bez wpływu na wyniki testu, dzięki czemu można go używać bez obaw.

 

P1: Kiedy zostanie wysłany?
A1: Wyślemy towar tak szybko, jak to możliwe w ciągu 7 dni roboczych od otrzymania płatności.(W przypadku czynników zewnętrznych, takich jak epidemia, dostawa może się opóźnić)

 

P2: czy obsługuje OEM/ODM?
A2: Może być obsługiwany, ale określona ilość musi przekraczać 100 000 sztuk, co jest wygodne w przypadku niestandardowych produktów.

 

P3: Jak radzi sobie twoja fabryka pod względem kontroli jakości?
A3: Posiadamy krajowe certyfikaty ISO9001 i ISO13485.Nasz proces produkcyjny jest zgodny ze standardowymi procedurami, aby zapewnić optymalną jakość produktu.

 

P4: Jak zapewnić obsługę posprzedażną?
A4: Zapewniamy profesjonalną techniczną obsługę posprzedażną online.Możemy zapewnić Ci indywidualne wskazówki za pośrednictwem wideo, telefonu itp.

 

P5: Jaka jest metoda płatności?
A5: Otrzymujemy płatność przez T / T.

 

P6: jak wysłać?
A6: Wybierz najlepszą dla siebie metodę wysyłki, otrzymując oferty od naszych wielu współpracujących przewoźników, a także wysyłaj zgodnie z własnymi wymaganiami.