Krewetki Nitrofuran AMOZ 0,03ppb Zestaw diagnostyczny ELISA do czułości bezpieczeństwa żywności mlecznej 96 studzienek / zestaw

Nitrofuran AMOZ Diagnostyczny zestaw ELISA do czułości na mleko 0,03ppb 96 studzienek/zestaw

 

1.Zestaw diagnostyczny ELISAZasada

Ten zestaw do wykrywania oparty jest na kompetycyjnym teście immunologicznym do wykrywania AMOZ w próbkach.Sprzężone antygeny są wstępnie powlekane na paskach z mikrostudzienkami.AMOZ w próbce konkuruje ze skoniugowanym antygenem wstępnie opłaszczonym na pasku z mikrodołkami o przeciwciało anty-AMOZ.Po dodaniu koniugatu enzymu dodaje się substrat TMB do barwienia.Wartość gęstości optycznej (OD) próbki jest ujemnie skorelowana z jej AMOZ.Wartość tę porównuje się z krzywą wzorcową, a następnie uzyskuje się stężenie AMOZ.

 

2. Specyfikacje techniczne

 

Czułość: 0,03 ppb

Temperatura inkubacji: 25 ℃

Czas inkubacji: 30min ~ 15min

Granica wykrywalności Tkanka, jajo, miód: 0,1 ppb

Szybkość reakcji krzyżowych

AMOZ 100%

AHD < 0,1%

AOZ < 0,1%

SEM < 0,1%

Wskaźnik odzysku

Tkanka 80 ± 25%

Miód 75 ± 25%

Jajko 95 ± 25%

 

3.Nitrofuran AMOZ ELISA Test bezpieczeństwa żywnościskładniki

 

1	Paski mikrodołków	12 pasków z 8 wyjmowanymi studnie każda
2	6× roztwór standardowy (każdy po 1 ml)	0 ppb	0,03ppb
		0,09 ppb	0,27 ppb
		0,81 ppb	2,43 ppb
3	Koniugat enzymu	7ml	czerwona czapka
4	Roztwór roboczy przeciwciała	7ml	niebieska czapka
5	Podłoże A	7ml	Biała czapka
6	Podłoże B	7ml	czarna czapka
7	Zatrzymaj rozwiązanie	7ml	żółta czapka
8	20× skoncentrowany bufor do płukania	40ml	Biała czapka
9	2× stężony roztwór do ponownego rozpuszczania	50 ml	przezroczysta czapka
10	2-Nitrobenzaldehyd (C7H5NO3)	2-Nitrobenzaldehyd (C7H5NO3)	2-Nitrobenzaldehyd (C7H5NO3)

 

 

4. Materiały wymagane, ale niedostarczone
1) Wyposażenie: czytnik mikropłytek, drukarka, homogenizator, suszarka azotowa, wirówka, wirówka, rurka pomiarowa, waga (odwrotność 0,01g), inkubator, łaźnia wodna;
2) Mikropipety: jednokanałowe 20-200µL, 100-1000µL, wielokanałowe 30-300µL;
3) Odczynniki: NaOH, octan etylu, n-heksan, HCl (ok. 36,5%), K2HPO4 · 3H2O

5. Przygotowanie próbki

pouczać
Przed jakąkolwiek obróbką wstępną próbki należy uwzględnić następujące punkty:
1) w eksperymencie można używać tylko jednorazowych końcówek, a końcówki należy wymieniać podczas zasysania różnych odczynników;
2) Przed eksperymentem każdy sprzęt doświadczalny musi zostać oczyszczony i ponownie oczyszczony, jeśli to konieczne, aby uniknąć zanieczyszczenia zakłócającego wyniki eksperymentu.

Przygotowanie roztworu przed wstępną obróbką próbki:
1) 0,1 M K2HPO4: Rozpuść 11,4 g K2HPO4 · 3H2O w dejonizowanej wodzie do 500 ml.
2) 1 M HCl: Rozpuść 8,6 ml HCl (około 36,5%) w dejonizowanej wodzie do 100 ml.
3) 1 M NaOH: Rozpuść 4 g NaOH w dejonizowanej wodzie do 100 ml.
4) Rozcieńczyć 2× stężony roztwór do ponownego rozpuszczania wodą dejonizowaną w stosunku 1:1 (1 ml stężonego roztworu do ponownego rozpuszczania + 1 ml wody dejonizowanej) w celu ponownego rozpuszczenia próbki.

 

5.1 Przygotowanie próbki

a)Papierowa chusteczka, jajka
1) Odważyć 1 ± 0,05 g jednorodnej próbki, dodać 4 ml wody destylowanej, 0,5 ml 1M HCl i 100 µl 2-nitrobenzaldehydu (C7H5NO3) do każdej probówki i odpowiednio wstrząsać przez 2 minuty;
2) Inkubować przez noc w temperaturze 37°C (około 16 godzin) lub w łaźni wodnej w temperaturze 56°C (2 godziny).
3) Dodać 5 ml 0,1 M K2HPO4, 0,4 ml 1 M NaOH i 6 ml octanu etylu do każdej probówki i wstrząsać przez 30 sekund.
4) Wirować w temperaturze pokojowej (20-25°C) powyżej 4000 obr./min przez 10 min (jeśli występuje emulgacja lub warstwa octanu etylu jest mniejsza niż 3 ml, inkubować próbkę w łaźni wodnej w temperaturze 80°C przez 10 min i odwirować kilka razy lub zwiększyć prędkość i wydłużyć czas wirowania).
5) Przenieś warstwę 3 ml octanu etylu do nowej probówki wirówkowej i odparuj do sucha za pomocą azotu lub powietrza w temperaturze 50°C.
6) Rozpuścić wysuszoną pozostałość w 2 ml n-heksanu, dodać 1 ml rozcieńczonego rekonstytuowanego roztworu, dobrze mieszać przez 30 sekund, wirować w temperaturze pokojowej (20-25°C) z prędkością ponad 4000 obr./min przez 10 minuty;usunąć górną fazę n-heksanową.(Jeżeli wystąpi emulgowanie, usunąć górną fazę n-heksanową, inkubować próbkę w łaźni wodnej o temperaturze 70°C przez 10-20 min i wielokrotnie wirować).
7) Pobrać do analizy 50 µl dolnej warstwy.
Współczynnik rozcieńczenia próbki: 2

b) miód
1) Odważyć 2 ± 0,05 g jednorodnej próbki (miodu), dodać 4 ml wody destylowanej, 0,5 ml 1 M HCl i 100 µl 2-nitrobenzaldehydu (C7H5NO3) do każdej probówki, odpowiednio wstrząsać przez 2 minuty;
2) Inkubować przez noc w temperaturze 37°C (około 16 godzin) lub w łaźni wodnej w temperaturze 56°C (2 godziny).
3) Dodać 5 ml 0,1 M K2HPO4, 0,4 ml 1 M NaOH i 6 ml octanu etylu do każdej probówki i wstrząsać przez 30 sekund.
4) Wirować w temperaturze pokojowej (20-25°C) powyżej 4000 obr./min przez 10 min (jeśli występuje emulgacja lub warstwa octanu etylu jest mniejsza niż 3 ml, wirować próbkę wielokrotnie w łaźni wodnej w temperaturze 80°C przez 10 min; lub zwiększyć prędkość i wydłużyć czas wirowania).
5) Przenieś warstwę 3 ml octanu etylu do nowej probówki wirówkowej i odparuj do sucha za pomocą azotu lub powietrza w temperaturze 50°C.
6) Rozpuścić wysuszoną pozostałość w 2 ml n-heksanu, dodać 1 ml rozcieńczonego rekonstytuowanego roztworu, dobrze mieszać przez 30 sekund, wirować w temperaturze pokojowej (20-25°C) z prędkością 4000 obr./min lub większą przez 10 minut;usunąć górną fazę n-heksanową.(Jeżeli wystąpi emulgowanie, usunąć górną fazę n-heksanową, inkubować próbkę w łaźni wodnej o temperaturze 70°C przez 10-20 min i wielokrotnie wirować).
7) Pobrać do analizy 50 µl dolnej warstwy.
Współczynnik rozcieńczenia próbki: 1

 

 

6. Procedura ELISA

6.1 Opis
1) Przed użyciem doprowadzić wszystkie odczynniki i paski z mikrostudzienkami do temperatury pokojowej (20-25°C);
2) Natychmiast po użyciu umieść wszystkie odczynniki w temperaturze 2-8°C;
3) Powtarzalność testów ELISA w dużej mierze zależy od konsystencji przemywanej płytki.Prawidłowe przeprowadzenie płukania płytek jest kluczem do procedury ELISA;
4) Podczas inkubacji w stałej temperaturze wszystkie próbki i odczynniki muszą być chronione przed światłem, a każda mikropłytka powinna być szczelnie zamknięta folią ochronną.

6.2 Procedura operacyjna
1) Umieścić zestaw w temperaturze pokojowej (20-25°C) na co najmniej 30 minut, pamiętać, że każdy odczynnik należy wstrząsnąć i dobrze wymieszać przed użyciem, a następnie umieścić wymagane paski mikrostudzienek w ramce płytki.Nieużywane mikropłytki należy ponownie zamknąć i przechowywać w temperaturze 2-8°C, nie zamrażać.
2) Przygotowanie roztworu: 40 ml 20 × stężonego buforu do przemywania rozcieńczonego w stosunku 1:19 wodą dejonizowaną (1 część 20 × stężony bufor do przemywania + 19 części wody dejonizowanej).Lub przygotuj w razie potrzeby.
3) Numeracja: Ponumerować mikrostudzienki zgodnie z próbkami i roztworami wzorcowymi;każdą próbkę i roztwór wzorcowy należy sporządzić w dwóch egzemplarzach i odnotować ich położenie.
4) Dodać 50 µl próbki lub roztworu wzorcowego do oddzielnych studzienek z powtórzeniami;dodać 50 µl koniugatu enzymu do każdego dołka, następnie dodać 50 µl roztworu roboczego przeciwciała i wstrząsnąć płytką ręcznie, aby delikatnie wymieszać.Zamknąć mikropłytkę folią ochronną i inkubować w temperaturze 25°C przez 30 minut.
5) Wylać płyn do mikrodołków, osuszyć na bibule, dodać 250 µl/dołek buforu do płukania, aby przemyć płytkę z mikrodołkami przez 15-30 sekund, następnie wyjąć i osuszyć bibułą, powtórzyć 4-5 razy.(Jeżeli po stuknięciu pojawią się pęcherzyki powietrza, odetnij je czystą końcówką).
6) Wywoływanie koloru: Dodać 50 µl substratu A do każdego dołka, a następnie 50 µl substratu B. Delikatnie wymieszać, wstrząsając płytką ręką, a następnie inkubować w ciemności w temperaturze 25°C przez 15 min w celu wywołania koloru.
7) Oznaczenie: Dodać 50 μl roztworu zatrzymującego reakcję do każdego dołka.Delikatnie wymieszaj, potrząsając płytką ręką.Ustaw długość fali czytnika mikropłytek na 450 nm, aby określić wartość OD każdego dołka.(Zaleca się odczyt wartości OD przy dwóch długościach fali 450/630nm w ciągu 5 minut).

 

7. Ocena wyniku

 

Istnieją dwie metody oceny wyników: pierwsza to zgrubna ocena, a druga to oznaczenie ilościowe.Należy zauważyć, że wartość OD próbki ma ujemną korelację ze stężeniem AMOZ.

7.1 Określenie jakościowe

Zakres stężeń (ng/ml) AMOZ można uzyskać porównując średnią wartość OD próbki z wartością roztworu wzorcowego.Zakładając, że wartość OD próbkiⅠ wynosi 0,3, a próbkiⅡ 1,0, wartość OD roztworów wzorcowych wynosi: 2,243 dla 0 ppb, 1,816 dla 0,03 ppb, 1,415 dla 0,09 ppb, 0,74 dla 0,27 ppb, 0,313 dla 0,81 ppb , 0,155 dla 2,43ppb, odpowiednio zakres stężeń próbkiⅠ wynosi od 0,81 do 2,43ppb, a próbkiⅡ od 0,09 do 0,27ppb.

7.2 Oznaczanie ilościowe

Średnie wartości absorbancji uzyskuje się dzieląc średnią wartość OD (B) próbki i roztworu wzorcowego przez wartość OD (B0) pierwszego roztworu wzorcowego (standard 0), a następnie mnożąc przez 100%, czyli ,

Procent wartości absorbancji =	B	×100%
	B0

B—średnia wartość OD próbki lub roztworu wzorcowego

B0 — średnia wartość OD roztworu wzorcowego 0 ng/mL

Narysuj krzywą wzorcową z wartościami procentowymi absorpcji roztworu wzorcowego i wartościami półlogarytmu roztworu wzorcowego AMOZ (ng/ml) odpowiednio na osiach Y i X.Odczytać odpowiednie stężenie próbki z krzywej wzorcowej poprzez włączenie jej procentowej absorpcji do krzywej wzorcowej.Uzyskana wartość jest następnie mnożona przez odpowiednią krotność rozcieńczenia, ostatecznie uzyskując stężenie AMOZ w próbce.

 

8. Sprawy wymagające uwagi
1) Temperatura pokojowa jest niższa niż 25 ℃ lub temperatura odczynnika, a próbka nie powróciła do temperatury pokojowej (20-25 ℃), co spowoduje spadek standardowej wartości OD.
2) Podczas procesu płukania suszeniu mikropłytki towarzyszyć będzie nieliniowość krzywej wzorcowej i niezadowalająca powtarzalność;dlatego przejdź do następnego kroku natychmiast po praniu.
3) Dobrze wymieszaj, w przeciwnym razie powtarzalność będzie słaba.
4) Roztworem zatrzymującym jest 2 M roztwór kwasu siarkowego, unikać kontaktu ze skórą.
5) Nie używaj zestawu po upływie daty ważności.Użycie rozcieńczonych lub zafałszowanych odczynników z zestawu może spowodować zmiany czułości i wartości OD wykrywania.Nie wymieniać odczynników z różnych serii zestawów.
6) Ponownie zamknij nieużywane mikropłytki w torebkach samouszczelniających.Standardowe roztwory i bezbarwne łączniki są światłoczułe i nie mogą być bezpośrednio wystawione na działanie światła.
7) Wyrzuć każdy roztwór barwiący, którego kolor wskazuje na degradację roztworu.Wartość wykrywalności mniejsza niż 0,5 dla roztworu wzorcowego 1 (0 ppb) wskazuje na degradację.
8) Optymalna temperatura reakcji wynosi 25 ℃, a czułość wykrywania i wartość OD zmienią się, jeśli temperatura będzie zbyt wysoka lub zbyt niska.
 

9. Przechowywanie i okres ważności
Przechowywanie: Przechowywać w temperaturze 2-8°C, nie zamrażać.
Data ważności: 12 miesięcy;data produkcji jest na pudełku.
Uwaga: Jeśli opakowanie próżniowe mikropłytki przecieka, nadal można go używać bez wpływu na wyniki testu, dzięki czemu można go używać z pewnością.

 

 

P1: kiedy zostanie wysłane?
A1: Wysyłamy towar tak szybko, jak to możliwe w ciągu 7 dni roboczych po otrzymaniu płatności.(W przypadku czynników zewnętrznych np. epidemii dostawa może się opóźnić)

 

P2: czy obsługuje OEM/ODM?
A2: Może być obsługiwany, ale konkretna ilość musi przekraczać 100 000 sztuk, co jest wygodne w przypadku produktów niestandardowych.

 

P3: Jak radzi sobie Twoja fabryka pod względem kontroli jakości?
A3: Posiadamy krajowe certyfikaty ISO9001 i ISO13485.Nasz proces produkcyjny jest zgodny ze standardowymi procedurami, aby zapewnić optymalną jakość produktu.

 

P4: Jak zapewnić obsługę posprzedażną?
A4: Zapewniamy profesjonalną techniczną obsługę posprzedażną online.Możemy zapewnić indywidualne wskazówki przez wideo, telefon itp.

 

P5: Jaka jest metoda płatności?
A5: Otrzymujemy płatność przez T / T.

 

P6: jak wysłać?
O6: Wybierz najlepszą dla siebie metodę wysyłki, uzyskując wyceny od wielu współpracujących przewoźników, a także wysyłaj zgodnie z własnymi wymaganiami.