Zestaw do szybkiego wykrywania przeciwciał metronidazol ELISA dla miodu 96 studzienek/zestaw, czułość 0,05 Ppb

Zestaw testowy Metronidazol ELISA do miodu 96 studzienek/zestaw Czułość 0,05 ppb

1. Zasada

Ten zestaw testowy jest oparty na kompetycyjnym teście immunoenzymatycznym do wykrywania metronidazolu w próbce.Antygeny sprzęgające są wstępnie powlekane na paskach mikrostudzienek.Metronidazol w próbce i antygeny sprzęgające pokryte wstępnie na paskach mikrostudzienek konkurują o przeciwciała przeciwko metronidazolowi.Po dodaniu koniugatu enzymu dodaje się substrat TMB w celu zabarwienia.Wartość gęstości optycznej (OD) próbki wykazuje ujemną korelację z zawartym w niej metronidazolem.Wartość tę porównuje się z krzywą standardową, a następnie uzyskuje się stężenie metronidazolu.

2. Specyfikacje techniczne

Czułość: 0,05 ppb
Granica wykrywalności
Miód: około 0,1 ppb
Uwaga: ppb= ng/ml lub ng/g

Wskaźnik reakcji krzyżowej:
Metronidazol 100%
Ornidazol 83%
Secnidazol 110%
Metronidazol-OH <1%
Tynidazol <1%
Dimetridazol <1%

Współczynnik odzysku: 90±30%
 

3. Komponenty

4. Materiały wymagane, ale niedostarczone

1) Wyposażenie: czytnik mikropłytek (450 nm, 630 nm), drukarka, urządzenie do suszenia azotem, wir, wytrząsarka, wirówka (3000 g i więcej), pipety pomiarowe, waga (odwrotność 0,01 g), inkubator (4 ℃, 25 ℃ ), łaźnia wodna, minutnik;
2) Mikropipety: jednokanałowe 20-200 µl, 100-1000 µl i ośmiokanałowe 30～300 µl;
3) Odczynniki (AR): Na2HPO4▪12H2O,NaH2PO4·2H2O,octan etylu, heksan, woda dejonizowana.

5. Wstępna obróbka próbki

Instrukcje
Przed wstępną obróbką jakiejkolwiek próbki należy uwzględnić następujące punkty:
1) Do eksperymentów można używać tylko jednorazowych końcówek, które należy wymieniać, gdy są używane do pochłaniania różnych odczynników;
2) Przed eksperymentem każdy sprzęt doświadczalny musi być czysty i powinien zostać ponownie oczyszczony w razie potrzeby, aby uniknąć zanieczyszczenia, które zakłóca wyniki eksperymentu.

Przygotowanie roztworu przed wstępną obróbką próbki:
1) Bufor do płukania: 1 część 20x stężonego buforu do płukania + 19 części wody dejonizowanej.
2) 0,2 M bufor fosforanowy: zważyć 25,8 g Na2HPO4▪12H2O, 4,350 g NaH2PO4·2H2O, dodać 500 ml wody dejonizowanej do całkowitego rozpuszczenia.
 

5.1 Przygotowanie próbki
Miód
1) Odważyć 2,0 ± 0,05 g próbki miodu w 50 ml plastikowej probówce wirówki;
2) Dodać 2 ml 0,2 M buforu fosforanowego, następnie dodać 8 ml octanu etylu, mocno wstrząsać przez 5 min (lub użyć worteksu przez 3 min) w celu całkowitego kontaktu próbki z fazą organiczną;
3) Wirować przy powyżej 3000 g w temperaturze pokojowej przez 5 min;
4) Przenieś 4 ml przezroczystego płynu górnej warstwy do 5 ml probówki wirówkowej (uwaga: nie pobieraj fazy wodnej warstwy dolnej), przedmuchaj do wyschnięcia w łaźni wodnej o temperaturze 50-60 ℃;
5) Dodaj odpowiednio 1 ml heksanu i 0,5 ml roztworu do ponownego rozpuszczania, mocno wstrząsaj przez 2 min (lub użyj worteksu przez 1 min);
6) Wirować przy powyżej 3000 g w temperaturze pokojowej przez 5 min;
7) Odrzuć górną warstwę organiczną, weź 50ul cieczy w dolnej warstwie do przetestowania.
Krotność rozcieńczenia próbki: 0,5

6. Procedury ELISA

6.1 Instrukcje
1) Przed użyciem wszystkie odczynniki i paski z mikrostudzienkami należy doprowadzić do temperatury pokojowej (20-25 ℃);
2) Przywróć wszystkie odczynniki do 2-8 ℃ natychmiast po użyciu;
3) Powtarzalność analizy ELISA w dużym stopniu zależy od konsystencji płukania płytek.Prawidłowe działanie mycia płyt jest kluczowym punktem w procedurach ELISA;
4) W przypadku inkubacji w stałych temperaturach wszystkie próbki i odczynniki muszą unikać ekspozycji na światło, a każda mikropłytka powinna być uszczelniona membraną przykrywającą.

6.2 Procedury operacyjne
1. Doprowadź zestaw testowy do temperatury pokojowej (20-25 ℃) na co najmniej 30 minut, pamiętaj, że każdy odczynnik musi być wstrząsany, aby równomiernie wymieszać przed użyciem, umieść wymagane paski z mikrostudzienkami w ramkach płytek.Ponownie zamknij nieużywaną mikropłytkę, przechowuj w temperaturze 2-8 ℃, nie zamrażaj.
2. Numeracja: ponumeruj mikrostudzienki według próbek i roztworu wzorcowego;każda próbka i roztwór wzorcowy powinny być wykonane w dwóch egzemplarzach, zanotować ich pozycje.
3. Dodać 50 µl próbki lub roztworu wzorcowego do oddzielnych duplikatów dołków;następnie dodać 50 µl roztworu roboczego przeciwciała do każdego dołka, delikatnie wymieszać przez ręczne wytrząsanie płytki.Uszczelnij mikropłytkę membraną przykrywającą i inkubuj w temperaturze 4 ℃ przez 60 min w ciemności.
4. Wylać płyn z mikrostudzienki, dodać 250 µl/studzienkę buforu do płukania do płukania mikropłytki przez 15-30 s, następnie wylać bufor do płukania z mikrostudzienki, dodać bufor do płukania do płukania w ten sposób 3-4 razy, po czym wyjąć i klapkę do wyschnięcia papierem chłonnym.
5. Dodaj 100ul koniugatu enzymu (nie umieszczaj mikropłytki w temperaturze pokojowej przez długi czas po etapie mycia, aby uniknąć wysuszenia mikropłytki prowadzącej do różnicy wyników), delikatnie wymieszaj, ręcznie wstrząsając płytką.Uszczelnij mikropłytkę membraną przykrywającą i inkubuj w 25 ℃ przez 20 min w ciemności.Pranie jak w kroku 4.
6. Zabarwienie: dodaj 100ul mieszaniny roztworu substratu A i roztworu substratu B do każdego dołka (Uwaga: wymieszaj roztwór substratu A i roztwór substratu B w stosunku 1:1, użyj mieszaniny w ciągu 10 minut, nie używaj metalu do przechowywania lub mieszania, aby uniknąć nieprawidłowego podłoża).Delikatnie wymieszać przez ręczne potrząsanie płytką, uszczelnić mikropłytkę membraną przykrywającą, a następnie inkubować w 25 ℃ przez 15 min w ciemności w celu zabarwienia.
7. Oznaczanie: dodać 50 µl roztworu zatrzymującego reakcję do każdego dołka.Delikatnie wymieszać przez ręczne potrząsanie płytką.Zatrzymaj się pomyślnie, gdy kolor podłoża zmieni się z niebieskiego na żółty.Zalecamy odczytanie wartości OD przy podwójnej długości fali 450/630 nm w ciągu 5 minut.

7. Ocena wyniku

Istnieją dwie metody oceny wyników: pierwsza to ocena zgrubna, a druga to określenie ilościowe.Należy zauważyć, że wartość OD próbki ma ujemną korelację ze stężeniem metronidazolu.

7.1 Ocena jakościowa
Zakres stężeń (ng/mL) metronidazolu można uzyskać porównując średnią wartość OD próbki z wartością roztworu wzorcowego.Zakładając, że wartość OD próbkiⅠ wynosi 0,3, a próbkiⅡ wynosi 1,0, wartość OD roztworów wzorcowych wynosi: 2,243 dla 0 ppb, 1,816 dla 0,05 ppb, 1,415 dla 0,15 ppb, 0,74 dla 0,45 ppb, 0,313 dla 1,35 ppb 0,155 dla 4,05 ppb, odpowiednio zakres stężeń próbkiⅠ wynosi 1,35 do 4,05 ppb, a próbkiⅡ 0,05 do 0,45 ppb.

7.2 Oznaczenie ilościowe
Średnie wartości absorbancji otrzymuje się dla średniej wartości OD (B) próbki i roztworu wzorcowego podzielonej przez wartość OD (B0) pierwszego roztworu wzorcowego (0 wzorzec), a następnie mnożone przez 100%, czyli ,

B — średnia wartość OD próbki lub roztworu wzorcowego
B0 — średnia wartość OD roztworu wzorcowego 0 ng/mL
Narysuj krzywą standardową z procentami absorpcji roztworu wzorcowego i wartościami półlogarytmu standardowego roztworu metronidazolu (ng/ml) odpowiednio na osiach Y i X.Odczytaj odpowiednie stężenie próbki z krzywej standardowej, włączając jej procent absorpcji do krzywej standardowej.Otrzymaną wartość mnoży się następnie przez odpowiednią krotność rozcieńczenia, uzyskując ostatecznie stężenie metronidazolu w próbce.
Korzystanie z profesjonalnego oprogramowania analitycznego tego zestawu będzie wygodniejsze w przypadku dokładnej i szybkiej analizy dużej ilości próbek.(Prosimy o kontakt w sprawie tego oprogramowania).

8. Środki ostrożności

1. Temperatura pokojowa poniżej 25 ℃ lub temperatura odczynników i próbek, które nie zostały przywrócone do temperatury pokojowej (20-25 ℃) doprowadzą do niższej standardowej wartości OD.
2. Suchości mikropłytki w procesie mycia będą towarzyszyć sytuacje obejmujące nieliniowe krzywe wzorcowe i niepożądaną odtwarzalność;Więc przejdź do następnego kroku natychmiast po umyciu.
3. Mieszaj równomiernie, w przeciwnym razie wystąpi niepożądana powtarzalność.
4. Roztwór zatrzymujący to 2 M roztwór kwasu siarkowego, unikaj kontaktu ze skórą.
5. Nie używać zestawu po upływie terminu ważności.Użycie rozcieńczonych lub zafałszowanych odczynników z zestawów spowoduje zmiany czułości i wykrywanych wartości OD.Nie należy wymieniać odczynników z zestawów z różnych partii, które mają być używane.
6. Włóż niewykorzystaną mikropłytkę do samouszczelniającego się worka, aby ponownie ją zamknąć.Standardowy roztwór i bezbarwny środek barwiący są wrażliwe na światło, a zatem nie mogą być bezpośrednio wystawione na działanie światła.
7. Wyrzuć roztwór barwiący o dowolnym kolorze, który wskazuje na degenerację tego roztworu.Wartość wykrywania roztworu wzorcowego 1 (0 ppb) mniejsza niż 0,5 wskazuje na jego degenerację.

9. Przechowywanie i data ważności

Przechowywanie: przechowywać w temperaturze 2-8 ℃, nie zamrażać.
Termin ważności: 12 miesięcy;data produkcji znajduje się na pudełku.

P1: Kiedy zostanie wysłany?
A1: Wyślemy towar tak szybko, jak to możliwe w ciągu 7 dni roboczych od otrzymania płatności.(W przypadku czynników zewnętrznych, takich jak epidemia, dostawa może się opóźnić)

P2: czy obsługuje OEM/ODM?
A2: Może być obsługiwany, ale określona ilość musi przekraczać 100 000 sztuk, co jest wygodne w przypadku niestandardowych produktów.

P3: Jak radzi sobie twoja fabryka pod względem kontroli jakości?
A3: Posiadamy krajowe certyfikaty ISO9001 i ISO13485.Nasz proces produkcyjny jest zgodny ze standardowymi procedurami, aby zapewnić optymalną jakość produktu.

P4: Jak zapewnić obsługę posprzedażną?
A4: Zapewniamy profesjonalną techniczną obsługę posprzedażną online.Możemy zapewnić Ci indywidualne wskazówki za pośrednictwem wideo, telefonu itp.

P5: Jaka jest metoda płatności?
A5: Otrzymujemy płatność przez T / T.

P6: jak wysłać?
A6: Wybierz najlepszą dla siebie metodę wysyłki, otrzymując oferty od naszych wielu współpracujących przewoźników, a także wysyłaj zgodnie z własnymi wymaganiami.