Zestaw diagnostyczny MQCA ELISA dla kaczki wieprzowej z kurczaka 96 studzienek / zestaw Czułość 0,5 Ppb

Zestaw testowy MQCA ELISA do kurczaka wieprzowego kaczki 96 dołków/zestawu Czułość 0,5 ppb

 

1. Zasada

Ten zestaw testowy jest oparty na kompetycyjnym teście immunologicznym do wykrywania MQCA w próbce.Antygeny sprzęgające są wstępnie powlekane na paskach mikrostudzienek.MQCA w próbce i antygeny sprzęgające wstępnie powleczone na paskach z mikrostudzienkami konkurują o przeciwciało anty-MQCA.Po dodaniu koniugatu enzymu dodaje się substrat TMB w celu zabarwienia.Wartość gęstości optycznej (OD) próbki ma ujemną korelację z zawartym w niej MQCA.Wartość tę porównuje się z krzywą standardową i następnie uzyskuje się stężenie MQCA.

 

2. Specyfikacje techniczne

Czułość: 0,5 ppb
Temperatura inkubatora: 25 ℃
Czas inkubacji: 30min ~ 15min

Granica wykrywalności:
Tkanka 1 ppb

Szybkość reakcji krzyżowych:
MQCA 100%
Olaquindoks <0,1%
Wskaźnik odzysku:
Tkanka 85%±10%

 

3. Komponenty

 

1	Paski mikrodołków	12 pasków z 8 wyjmowanymi dołkami każdy
2	6× roztwór standardowy (każdy po 1 ml)	0 ppb	0,5 ppb
		1,5 ppb	4,5 ppb
		13,5 ppb	40,5 ppb
3	Skoncentrowany koniugat enzymu	1 ml	czerwona czapka
4	Roztwór roboczy przeciwciała	8 ml	niebieska czapka
5	Podłoże A	7 ml	Biała czapka
6	Podłoże B	7 ml	czarna czapka
7	Zatrzymaj rozwiązanie	7 ml	żółta czapka
8	Roztwór do ponownego rozpuszczania	50 ml	przezroczysta czapka
9	20× skoncentrowany bufor do płukania	40 ml	Biała czapka

 

4. Materiały wymagane, ale niedostarczone

1) Wyposażenie: czytnik mikropłytek (450 nm / 630 nm), homogenizator, oscylator, wirówka, pipety pomiarowe, urządzenie do suszenia azotem i waga (odwrotność czułości 0,01 g), inkubator.
2) Mikropipetory: jednokanałowe 20 do 200 µL i 100 do 1000 µL oraz wielokanałowe 30 ~ 300 µl;
3) Odczynniki: octan etylu, n-heksan, HCl, NaCl, CH3CN

 

5. Wstępna obróbka próbki

Instrukcje
Przed przystąpieniem do wstępnej obróbki jakiegokolwiek rodzaju próbki należy wziąć pod uwagę następujące kwestie:
1) Do eksperymentów można używać tylko jednorazowych końcówek, a końcówki należy zmieniać, gdy są używane do absorbowania różnych odczynników;
2) Przed eksperymentem każde naczynie doświadczalne należy sprawdzić pod kątem czystości iw razie potrzeby ponownie wyczyścić, aby uniknąć zanieczyszczenia, które zakłóca wyniki doświadczenia.

przygotowanie próbki
1) Ekstrakt próbki (przechowywać w temperaturze 2 ~ 8 ℃ przez 1 miesiąc): Weź 8,6 ml stężonego HCl, dodaj wodę dejonizowaną do 500 ml, a następnie dodaj 10 g NaCl, aby uzyskać ekstrakt próbki.

5.1 Tkanka zwierzęca i drobiowa (kurczak, kaczka, wieprzowina):
1. Wziąć 2 ± 0,05 g zhomogenizowanej próbki do 50 ml probówki wirówkowej;
2. Dodać 4 ml ekstraktu próbki, dokładnie wstrząsać przez 1 min;
3. Dodaj 4 ml octanu etylu i 2 ml CH3CN, dobrze wstrząsaj przez 10 sekund;Wirować z prędkością 4000 obr./min w temperaturze pokojowej (20 - 25 ℃) przez 10 minut (Uwaga: ten krok wymaga tylko wstrząsania przez 10 sekund, wstrząsanie zbyt długie doprowadzi do emulgacji, jeśli pojawi się emulsyfikacja, weź określony supernatant, a następnie lekko potrząśnij probówką przez 5 sekund ponownie odwirować, aby uzyskać wystarczającą ilość supernatantu);
4. Wziąć 3 ml górnej warstwy fazy organicznej do przezroczystego pojemnika poniżej, aby wysuszyć azotem lub powietrzem w temp.
kąpiel wodna 56℃;
5. Dodać 1 ml N-heksanu, wstrząsać przez 30 sekund, następnie dodać 0,5 ml roztworu do ponownego rozpuszczania, wstrząsać i dokładnie mieszać przez 30 sekund;wirować przy 4000 obr/min w temperaturze pokojowej (20-25 ℃) przez 5 min.
6. Usunąć górną warstwę organiczną. Wziąć 50 µl dolnej warstwy do analizy.
Krotność rozcieńczenia próbki: 0,5

 

6. Procedury ELISA

6.1 Instrukcje
1) Przed użyciem doprowadzić wszystkie odczynniki i paski z mikrostudzienkami do temperatury pokojowej (20-25 ℃);
2) Natychmiast po użyciu przywróć wszystkie odczynniki do temperatury 2-8 ℃;
3) Powtarzalność analizy ELISA w dużym stopniu zależy od konsystencji płukania płytek.Prawidłowe działanie przemywania płytek jest kluczowym punktem w procedurach ELISA;
4) W przypadku inkubacji w stałych temperaturach wszystkie próbki i odczynniki nie mogą być wystawione na działanie światła, a każda mikropłytka powinna być szczelnie zamknięta membraną ochronną.

6.2 Procedury operacyjne
1) Wyjmij wszystkie niezbędne odczynniki i umieść w temperaturze pokojowej (20-25 ℃) na co najmniej 30 min.Należy pamiętać, że każdym odczynnikiem należy wstrząsnąć w celu równomiernego wymieszania przed użyciem;
2) Weź wymagane paski mikrostudzienek i ramki płytek.Ponownie uszczelnić nieużywaną mikropłytkę, przechowywać w temperaturze 2-8 ℃;
3) Przygotowanie roztworu: rozcieńczyć 40 ml 20× stężonego buforu do płukania wodą dejonizowaną w stosunku 1:19 (1 część 20× stężonego buforu do płukania + 19 części wody dejonizowanej) lub przygotować według potrzeb;
4) Numeracja: ponumerować mikrostudzienki zgodnie z próbkami i roztworem wzorcowym;każdą próbkę i roztwór wzorcowy należy wykonać w dwóch powtórzeniach;zapisywać swoje pozycje;
5) Przygotuj roztwór roboczy przeciwciała i stężony koniugat enzymu: Zmieszaj roztwór roboczy przeciwciała i stężony enzym koniugatu równomiernie w stosunku 10:1 (1000 µl roztworu roboczego przeciwciała + 100 µl stężonego koniugatu enzymu). być przechowywany, ilość opakowania ma dodatkową kwotę, przygotuj się jako proporcja jest OK.)
6) Dodać 20 µl próbki lub roztworu wzorcowego do oddzielnych duplikatów studzienek, a następnie dodać 70 µl mieszanego roztworu roboczego przeciwciała i koniugatu stężonego enzymu do każdej studzienki.Wymieszać delikatnie wstrząsając, uszczelnić mikropłytkę membraną ochronną i inkubować w temperaturze 25 ℃ w ciemności przez 30 minut;
7) Przemyć mikropłytkę buforem do płukania w ilości 250 µl/studzienkę cztery do pięciu razy;moczyć studzienkę w buforze płuczącym przez 15-30 sek., klapnąć do wyschnięcia bibułą (jeśli po trzepotaniu pojawiają się bąbelki, odciąć je czystymi końcówkami);
8) Zabarwienie: dodać 50 µl roztworu substratu A i 50 µl roztworu B do każdej studzienki.Wymieszać delikatnie wstrząsając i inkubować w temperaturze 25 ℃ przez 15 minut w ciemności w celu zabarwienia;
9) Oznaczanie: dodać 50 µl roztworu zatrzymującego reakcję do każdego dołka.Wymieszaj delikatnie potrząsając.Ustaw długość fali czytnika mikropłytek na 450 nm, aby określić wartość OD.(zaleca się odczytanie wartości OD przy podwójnej długości fali 450/630 nm w ciągu 5 min).

 

7. Ocena wyniku

Istnieją dwie metody oceny wyników;pierwszy to zgrubna ocena, a drugi to określenie ilościowe.Należy zauważyć, że wartość OD próbki ma ujemną korelację z zawartością MQCA.

7.1 Określenie jakościowe
Zakres stężeń (ng/ml) można uzyskać porównując średnią wartość OD próbki z wartością dla roztworu wzorcowego.Przyjmując, że wartość OD próbki Ⅰ wynosi 0,3, a próbki Ⅱ ​​1,0, natomiast roztworów wzorcowych wynoszą: 2,043 dla 0 ppb, 1,716 dla 0,5 ppb, 1,215 dla 1,5 ppb, 0,74 dla 4,5 ppb, 0,313 dla 13,5 ppb i 0,155 dla 40,5 ppb, odpowiednio zakres stężeń próbki Ⅰ wynosi od 13,5 do 40,5 ppb, a próbki Ⅱ ​​od 1,5 do 4,5 ppb.

7.2 Oznaczanie ilościowe
Średnie wartości absorbancji są równoważne procentowi średniej wartości OD (B) próbki i roztworu wzorcowego podzielonej przez wartość OD (B0) pierwszego roztworu wzorcowego (standard 0), a następnie pomnożonej przez 100%. , to znaczy,

 

Procent wartości absorbancji =	B	×100%
	B0

 

 

B — średnia (podwójne studzienki) wartość OD próbki lub roztworu wzorcowego
B0 — średnia wartość OD roztworu wzorcowego 0 ng/mL
Narysuj krzywą wzorcową z wartościami procentowymi absorpcji roztworów wzorcowych i wartościami półlogarytmu roztworów wzorcowych MQCA (ng/ml) odpowiednio na osiach Y i X.Odczytać odpowiednie stężenie próbki z krzywej wzorcowej poprzez włączenie jej procentowej absorpcji do krzywej wzorcowej.Otrzymaną wartość następnie mnoży się przez odpowiednią krotność rozcieńczenia, uzyskując ostatecznie stężenie MQCA w próbce.
Korzystanie z profesjonalnego oprogramowania analitycznego tego zestawu będzie wygodniejsze w przypadku dokładnej i szybkiej analizy dużej liczby próbek.(Prosimy o kontakt w sprawie tego oprogramowania)

 

8. Środki ostrożności

1. Temperatura pokojowa poniżej 25 ℃ lub temperatura odczynników i próbki nie przywrócone do temperatury pokojowej (20-25 ℃) doprowadzi do obniżenia standardowej wartości OD
2. Suchości mikropłytki w procesie mycia towarzyszyć będą sytuacje, w tym nieliniowe krzywe standardowe i niepożądana powtarzalność
3. Równomiernie wymieszać każdy odczynnik i mieszaninę reakcyjną i dokładnie przemyć mikropłytkę, w przeciwnym razie wystąpi niepożądana powtarzalność
4. Roztworem zatrzymującym jest 2 M roztwór kwasu siarkowego, unikaj kontaktu ze skórą;
5. Włóż nieużywaną mikropłytkę do automatycznie zamykającej się torebki, aby ją ponownie zamknąć.Standardowa substancja i bezbarwny barwnik są światłoczułe, dlatego nie można ich bezpośrednio wystawić na działanie światła
6. Nie używaj zestawu po upływie terminu ważności.Użycie rozcieńczonych lub zafałszowanych odczynników z zestawów spowoduje zmianę czułości i wartości OD wykrywania.Nie wymieniać odczynników z zestawów o różnych numerach partii do użycia
7. Wyrzuć roztwór barwiący o dowolnym kolorze, który wskazuje na degenerację tego roztworu.Wartość wykrywalna roztworu wzorcowego 0 mniejsza niż 0,5 wskazuje na jego degenerację
8. Optymalna temperatura reakcji to 25 ℃, zbyt wysoka lub zbyt niska temperatura spowoduje zmianę czułości detekcji i wartości OD.

 

9. Przechowywanie i data ważności

Przechowywanie: przechowywać w temperaturze 2-8 ℃, nie zamrażać.
Data ważności: 12 miesięcy;data produkcji na opakowaniu.
Uwaga: Jeśli opakowanie próżniowe mikropłytki jest nieszczelne, nadal można go używać, nie wpływa na wynik testu, można go zrelaksować.

 

 

 

 

 

P1: kiedy zostanie wysłane?
A1: Wysyłamy towar tak szybko, jak to możliwe w ciągu 7 dni roboczych po otrzymaniu płatności.(W przypadku czynników zewnętrznych np. epidemii dostawa może się opóźnić)

 

P2: czy obsługuje OEM/ODM?
A2: Może być obsługiwany, ale konkretna ilość musi przekraczać 100 000 sztuk, co jest wygodne w przypadku produktów niestandardowych.

 

P3: Jak radzi sobie Twoja fabryka pod względem kontroli jakości?
A3: Posiadamy krajowe certyfikaty ISO9001 i ISO13485.Nasz proces produkcyjny jest zgodny ze standardowymi procedurami, aby zapewnić optymalną jakość produktu.

 

P4: Jak zapewnić obsługę posprzedażną?
A4: Zapewniamy profesjonalną techniczną obsługę posprzedażną online.Możemy zapewnić indywidualne wskazówki przez wideo, telefon itp.

 

P5: Jaka jest metoda płatności?
A5: Otrzymujemy płatność przez T / T.

 

P6: jak wysłać?
O6: Wybierz najlepszą dla siebie metodę wysyłki, uzyskując wyceny od wielu współpracujących przewoźników, a także wysyłaj zgodnie z własnymi wymaganiami.