Beta Agonist ELISA Kit do testu surowicy w moczu z jajkiem z kurczaka Wieprzowina drobiowa 96 studzienek/zestaw

Beta Agonist ELISA Kit do mleka Jajko Surowica moczu Kurczak Wieprzowy 96 dołków/zestaw

 

1. Zasada

Zestaw testowy β-agonistów jest oparty na kompetycyjnym teście immunoenzymatycznym do wykrywania β-agonistów w próbce.Antygen sprzęgający jest wstępnie powlekany na paskach mikrostudzienek.Agoniści β w próbce i antygeny sprzęgające wstępnie opłaszczone na paskach mikrostudzienek konkurują o przeciwciała przeciw agonistom β.Po dodaniu koniugatu enzymu dodaje się substrat TMB w celu zabarwienia.Wartość gęstości optycznej (OD) próbki ma ujemną korelację z β-agonistami w próbce.Wartość tę porównuje się z krzywą standardową, a następnie otrzymuje się reszty β-agonistów.

 

2. Specyfikacje techniczne

Czułość: 0,1 ppb
Temperatura inkubacji: 25 ℃
Czas inkubacji: 30 min ～ 15 min

Granica wykrywalności:
Mocz świński 0,3 ppb
Wieprzowina 0,6ppb

Wskaźnik reakcji krzyżowej: Clenbuterol 100%, Cimaterol <4%, Brombuterol 60%, Mabuterol 108%, Bambuterol <5%, Klorprenalina <1%, Salbutamol 75%, Terbutalina 25%, Penbutolol 19%, Tulobuterol 23%, Fenoterol < 0,1%, raktopamina <0,1%

Wskaźnik odzysku:
Mocz świński, wieprzowina 90%±30%

 

3. Komponenty

 

1	Paski z mikrodołkami	12 pasków z 8 wyjmowanymi studnie każdy
2	6× roztwór wzorcowy (po 1 ml)	0ppb	0,1ppb
		0,3 ppb	0,9 ppb
		2,7 ppb	8,1 ppb
3	Koniugat enzymatyczny	7ml	czerwona czapka
4	Roztwór roboczy przeciwciał	10ml	niebieska czapka
5	Podłoże A	7ml	Biała czapka
6	Podłoże B	7ml	czarna czapka
7	Zatrzymaj rozwiązanie	7ml	żółta czapka
8	20× skoncentrowany bufor do płukania	40ml	Biała czapka
9	5× roztwór do ekstrakcji próbki	50ml	przezroczysta czapka

 

4. Materiały wymagane, ale niedostarczone

1) Wyposażenie: czytnik mikropłytek, drukarka, homogenizator, wir, oscylator, wirówka, inkubator, pipety pomiarowe, waga (odwrotność czułości 0,01 g)
2) Mikropipety: jednokanałowe 20-200 µl, 100-1000 µl i wielokanałowe 30-300 µl;
3) Odczynniki: NaOH, HCl.

 

5. Wstępna obróbka próbki

Instrukcje (przed obróbką wstępną należy zapoznać się z poniższymi punktami)
1) Do eksperymentów można używać tylko jednorazowych końcówek, które należy wymieniać, gdy są używane do pochłaniania różnych odczynników;
2) Przed eksperymentem każde naczynie doświadczalne musi być czyste i powinno zostać ponownie wyczyszczone, jeśli to konieczne, aby uniknąć zanieczyszczenia, które zakłóca wyniki eksperymentu.

Przygotowanie roztworu przed wstępną obróbką próbki:
1) 0,2M HCl: rozpuść 17,2 ml HCl w dejonizowanej wodzie do 1 litra.
2) 1M NaOH: rozpuścić 4g NaOH w dejonizowanej wodzie do 100 ml.
3) Roztwór do ekstrakcji próbki: 1 część 5X roztworu do ekstrakcji próbki + 4 części wody dejonizowanej, wymieszać równomiernie.

5.1 Mocz świński
Weź 20 µl czystego moczu, wykryj go bezpośrednio (jeśli mocz jest mętny, należy go filtrować lub wirować z prędkością 4000 obr/min przez 10 minut, a następnie wziąć czysty mocz).Przechowywać w zamrożonym środowisku, jeśli nie jest używany.
Krotność rozcieńczenia próbki: 1

5.2 Wieprzowina
1. Odważyć 2±0,05g próbki homogenizowanej tkanki do 50ml probówki wirówkowej, dodać 3ml 0,2M HCl, wstrząsać przez 3 min.
2. Następnie dodaj 600ul 1M roztworu NaOH i 2,4 ml roztworu ekstrakcyjnego próbki, wytrząsaj przez 3 min, wiruj przy 4000 obr/min w temperaturze pokojowej (20-25 ℃) przez 10 min.
3. Weź do analizy 20 µl górnej warstwy cieczy. (Uwaga: jeśli po odwirowaniu jest warstwa tłuszczu, usuń warstwę tłuszczu lub oddzielną warstwę tłuszczu, weź do analizy przezroczysty płyn)
Krotność rozcieńczenia próbki: 4

 

6. Procedury ELISA

6.1 Instrukcje
1. Przed użyciem należy doprowadzić wszystkie odczynniki i paski z mikrostudzienkami do temperatury pokojowej (20-25 ℃);
2. Przywróć wszystkie odczynniki do 2-8 ℃ natychmiast po użyciu;
3. Powtarzalność analizy ELISA w dużym stopniu zależy od konsystencji płukania płytek.Prawidłowe działanie mycia płyt jest kluczowym punktem w procedurach ELISA;
4. W celu inkubacji w stałych temperaturach wszystkie próbki i odczynniki muszą unikać ekspozycji na światło, a każda mikropłytka powinna być uszczelniona membraną przykrywającą.

6.2 Procedury operacyjne
1. Przenieś zestaw testowy do temperatury pokojowej (20-25 ℃) na co najmniej 30 minut, pamiętaj, że każdy odczynnik musi być równomiernie wstrząśnięty przed użyciem;
2. Umieść wymagane paski z mikrostudzienkami w ramkach płytek.Ponownie uszczelniono niewykorzystaną mikropłytkę, przechowywaną w temperaturze 2-8 ℃, nie zamrożoną.
3. Rozcieńczyć 40 ml 20X stężonego buforu do płukania w stosunku 1:19 wodą dejonizowaną (1 część 20X stężonego buforu do płukania + 19 części wody dejonizowanej).Lub przygotuj w razie potrzeby.
4. Numeracja: ponumeruj mikrostudzienki według próbek i roztworu wzorcowego;każdą próbkę i roztwór wzorcowy należy wykonać w dwóch egzemplarzach;zapisują swoje pozycje.
5. Dodać 20 µl próbki lub roztworu wzorcowego do oddzielnych duplikatów studzienek, następnie dodać koniugat enzymu, 50 µl/studzienkę;następnie dodać roztwór roboczy przeciwciał, 80 µl/studzienkę.Delikatnie wymieszać przez ręczne potrząsanie płytką, uszczelnić mikropłytkę membraną przykrywającą, inkubować w 25 ℃ przez 30 min.
6. Wylać płyn z mikrostudzienki, dodać 250 µl/studzienkę buforu do płukania, przemyć 4-5 razy po 15-30s za każdym razem, następnie wyjąć i osuszyć papierem chłonnym (jeśli po trzepotaniu są bąbelki, pociąć je z czystymi końcówkami).
7. Zabarwienie: dodaj 50 µl substratu A, a następnie dodaj 50 µl substratu B do każdego dołka.Delikatnie wymieszać przez ręczne potrząsanie płytką i inkubować w 25 ℃ przez 15 minut w ciemności w celu zabarwienia.
8. Oznaczanie: dodać 50 µl roztworu zatrzymującego reakcję do każdego dołka.Delikatnie wymieszać przez ręczne potrząsanie płytką.Ustaw długość fali czytnika mikropłytek na 450 nm, aby określić wartość OD każdego dołka.(Zalecamy odczytanie wartości OD przy podwójnej długości fali 450/630nm w ciągu 5 minut).

 

7. Ocena wyniku

Istnieją dwie metody oceny wyników;pierwszy to osąd zgrubny, drugi to określenie ilościowe.Należy zauważyć, że wartość OD próbki ma ujemną korelację ze stężeniem β-agonistów w próbce.

7.1 Ocena jakościowa
Zakres stężeń (ng/mL) uzyskany z porównania średniej wartości OD próbki z roztworem wzorcowym.Zakładając, że wartość OD próbki Ⅰ wynosi 0,3, a próbki Ⅱ ​​wynosi 1,0, wartość OD roztworów wzorcowych wynosi: 2,243 dla 0 ppb, 1,816 dla 0,1 ppb, 1,415 dla 0,3 ppb, 0,74 dla 0,9 ppb, 0,313 dla 2,7 ppb, 0,155 dla 8,1 ppb, odpowiednio zakres stężeń próbki Ⅰ wynosi od 2,7 do 8,1 ppb, a próbki Ⅱ ​​od 0,3 do 0,9 ppb.

7.2 Oznaczenie ilościowe
Średnie wartości absorbancji otrzymane dla średniej wartości OD (B) próbki i roztworu wzorcowego podzielone przez wartość OD (B0) pierwszego roztworu wzorcowego (0 wzorzec), a następnie pomnożone przez 100%, czyli

 

Procent wartości absorbancji =	B	×100%
	B0

 

B—średnia (podwójne studzienki) wartość OD próbki lub roztworu wzorcowego
B0 — średnia wartość OD roztworu wzorcowego 0 ng/mL
Narysuj krzywą standardową z procentami absorpcji roztworów wzorcowych i wartościami półlogarytmu roztworów wzorcowych β-agonistów (ng/mL) odpowiednio na osiach Y i X.Odczytaj odpowiednie stężenie próbki z krzywej standardowej, włączając jej procent absorpcji do krzywej standardowej.Otrzymaną wartość mnoży się następnie przez krotność rozcieńczenia, uzyskując ostatecznie stężenie β-agonistów w próbce.

 

8. Środki ostrożności

1. Temperatura pokojowa poniżej 25 ℃ lub temperatura odczynników i próbek, które nie zostaną przywrócone do temperatury pokojowej (20-25 ℃) doprowadzą do niższej standardowej wartości OD.
2.Suszeniu mikropłytki w procesie mycia będą towarzyszyć sytuacje, w tym nieliniowe krzywe wzorcowe i niepożądana odtwarzalność;Więc przejdź do następnego kroku natychmiast po umyciu.
3.Wymieszaj równomiernie, w przeciwnym razie wystąpi niepożądana powtarzalność.
4. Roztwór zatrzymujący to 2 M roztwór kwasu siarkowego, unikaj kontaktu ze skórą.
5. Nie używać zestawu po upływie terminu ważności.Użycie rozcieńczonych lub zafałszowanych odczynników z zestawów spowoduje zmiany czułości i wykrywanych wartości OD.Nie należy wymieniać odczynników z zestawów o różnych numerach serii, które mają być używane.
6. Włóż niewykorzystaną mikropłytkę do samouszczelniającego się worka, aby ponownie ją zamknąć.Substancja standardowa i bezbarwna substancja barwiąca są wrażliwe na światło, a zatem nie mogą być bezpośrednio wystawione na działanie światła.
7. Wyrzuć roztwór barwiący o dowolnym kolorze, który wskazuje na degenerację tego roztworu.Wartość wykrywania roztworu wzorcowego 0 (0 ppb) mniejsza niż 0,5 wskazuje na jego degenerację.
8. Optymalna temperatura reakcji to 25 ℃, a zbyt wysoka lub zbyt niska temperatura spowoduje zmiany czułości wykrywania i wartości OD.

 

9. Przechowywanie i data ważności

Przechowywanie: przechowywać w temperaturze 2-8 ℃, nie zamrażać.
Termin ważności: 12 miesięcy;data produkcji znajduje się na pudełku.
Uwagi: Jeśli opakowanie próżniowe płytek do mikromiareczkowania ma nieszczelność, płytka do mikromiareczkowania jest normalna i skuteczna, nie ma to wpływu na wynik eksperymentu.Zapraszamy do korzystania.

 

 

 

 

 

P1: Kiedy zostanie wysłany?
A1: Wyślemy towar tak szybko, jak to możliwe w ciągu 7 dni roboczych od otrzymania płatności.(W przypadku czynników zewnętrznych, takich jak epidemia, dostawa może się opóźnić)

 

P2: czy obsługuje OEM/ODM?
A2: Może być obsługiwany, ale określona ilość musi przekraczać 100 000 sztuk, co jest wygodne w przypadku niestandardowych produktów.

 

P3: Jak radzi sobie twoja fabryka pod względem kontroli jakości?
A3: Posiadamy krajowe certyfikaty ISO9001 i ISO13485.Nasz proces produkcyjny jest zgodny ze standardowymi procedurami, aby zapewnić optymalną jakość produktu.

 

P4: Jak zapewnić obsługę posprzedażną?
A4: Zapewniamy profesjonalną techniczną obsługę posprzedażną online.Możemy zapewnić Ci indywidualne wskazówki za pośrednictwem wideo, telefonu itp.

 

P5: Jaka jest metoda płatności?
A5: Otrzymujemy płatność przez T / T.

 

P6: jak wysłać?
A6: Wybierz najlepszą dla siebie metodę wysyłki, otrzymując oferty od naszych wielu współpracujących przewoźników, a także wysyłaj zgodnie z własnymi wymaganiami.