Fenyloetanoloamina A Zestaw testowy ELISA do podawania surowicy do mleka jaja w moczu 96 dołków / zestaw

Zestaw testowy fenyloetanoloaminy A ELISA do podawania surowicy do mleka jaja w moczu 96 studzienek / zestaw

 

1. Zasada

Zestaw testowy jest oparty na kompetycyjnym teście immunoenzymatycznym do wykrywania fenyloetanoloaminy A w próbce.Sprzężone antygeny są wstępnie powlekane na paskach mikrostudzienek.Fenyloetanoloamina A w próbce i antygeny sprzęgające wstępnie pokryte na paskach mikrostudzienek konkurują o przeciwciała przeciwko fenyloetanoloaminie A.Po dodaniu koniugatu enzymu dodaje się substrat TMB w celu zabarwienia.Wartość gęstości optycznej (OD) próbki wykazuje ujemną korelację ze stężeniem fenyloetanoloaminy A w próbce.Wartość porównuje się z krzywą standardową, a następnie uzyskuje się stężenie fenyloetanoloaminy A.

 

2. Specyfikacje techniczne

Czułość: 0,1 ppb
Temperatura inkubatora: 25 ℃
Czas inkubatora: 30min～15min

Granica wykrywalności
Tkanka 0,2 ppb
Podawanie 0,5 ppb

Reakcje krzyżowe:
Fenyloetanoloamina A 100%
Raktopamina <1%
Salbutamol <1%
Clenbuterol <1%
Wskaźnik odzysku
Tkanka, pasza 85±25%

 

3. Komponenty

 

1	Paski z mikrodołkami	12 pasków z 8 wyjmowanymi studnie każdy
2	6× roztwór wzorcowy (po 1 ml)	0ppb	0,1ppb
		0,3 ppb	0,9 ppb
		2,7 ppb	8,1 ppb
3	Koniugat enzymatyczny	7ml	czerwona czapka
4	Roztwór roboczy przeciwciał	7ml	niebieska czapka
5	Podłoże A	7ml	Biała czapka
6	Podłoże B	7ml	czarna czapka
7	Zatrzymaj rozwiązanie	7ml	żółta czapka
8	20× skoncentrowany bufor do płukania	40ml	Biała czapka
9	2× stężony roztwór do ponownego rozpuszczania	50ml	przezroczysta czapka

 

4. Materiały wymagane, ale niedostarczone

1) Wyposażenie: czytnik mikropłytek, drukarka, homogenizator, urządzenie do suszenia azotem, oscylator, wirówka, pipety pomiarowe, waga (odwrotność 0,01 g), inkubator.
2) Mikropipety: jednokanałowe 20-200 µl i 100-1000 µl oraz wielokanałowe 30-300 µl;
3) Odczynniki: octan etylu, N-heksan, lodowaty kwas octowy

 

5. Wstępna obróbka próbki

Instrukcje (przed obróbką wstępną należy zapoznać się z poniższymi punktami)
1) Do eksperymentów można używać tylko jednorazowych końcówek, które należy wymieniać, gdy są używane do pochłaniania różnych odczynników;
2) Przed eksperymentem każde naczynie doświadczalne musi być czyste i powinno zostać ponownie wyczyszczone, jeśli to konieczne, aby uniknąć zanieczyszczenia, które zakłóca wyniki eksperymentu.

Przygotowanie roztworu przed wstępną obróbką próbki:
1) Roztwór do ekstrakcji próbki: weź 99 ml octanu etylu, dodaj 1 ml lodowatego kwasu octowego i dobrze wymieszaj.
2) Roztwór do ponownego rozpuszczania próbki: 2 x stężony roztwór do ponownego rozpuszczania jest rozcieńczany wodą dejonizowaną w stosunku 1:1 (1 ml stężonego roztworu do ponownego rozpuszczania + 1 ml wody dejonizowanej), stosowany do ponownego rozpuszczania próbki.

Przygotowanie próbek
5.1 Kanał
1. Zmiel próbkę, weź 1,0 ± 0,05 g do 50 ml probówki wirówkowej;
2. Dodaj 10 mL roztworu ekstrakcyjnego próbki, wytrząsaj z oscylatorem przez 3 min;
3. Wirować z prędkością 4000 obr/min w temperaturze pokojowej przez 10 min;
4. Pobrać 2 ml supernatantu, wysuszyć azotem lub powietrzem w temperaturze 50-60 ℃;
5. Dodać 1 ml N-heksanu, następnie dodać 1 ml roztworu do ponownego rozpuszczania próbki, wstrząsać przez 30s;
6. Wirować z prędkością 4000 obr/min w temperaturze pokojowej przez 10 min, usunąć górną warstwę organiczną.
7. Pobierz 20 µL warstwy dolnej do analizy.
Krotność rozcieńczenia próbki: 5
(Ponieważ występują zakłócenia próbki, zaleca się 2PPB jako przykładową wartość CUT OFF.)

5.2 Tkanka
1.Pobierz jednorodną próbkę tkanki 2,0 ± 0,05 g do 50 ml probówki wirówkowej;
2.Dodaj 8 mL roztworu do ekstrakcji próbki, wytrząsaj z oscylatorem przez 2 min;
3. Wirować z prędkością 4000 obr/min w temperaturze pokojowej przez 10 min;
4. Weź 2 ml supernatantu, przedmuchaj do wyschnięcia azotem lub powietrzem w temperaturze 50-60 ℃;
5.Dodaj 1 ml N-heksanu, następnie dodaj 1 ml roztworu do ponownego rozpuszczania próbki, wytrząsaj przez 30s;
6. Wirować z prędkością 4000 obr/min w temperaturze pokojowej przez 10 min, usunąć górną warstwę organiczną.
7.Pobierz do analizy 20 µl warstwy dolnej.
Krotność rozcieńczenia próbki: 2
(Ponieważ występują zakłócenia próbki, zaleca się 1PPB jako przykładową wartość CUT OFF.)

 

6. Procedury ELISA

6.1 Instrukcje
1. Przed użyciem wszystkie odczynniki i paski z mikrostudzienkami doprowadzić do temperatury pokojowej (20-25 ℃).
2. Natychmiast po użyciu zwróć wszystkie odczynniki do temperatury 2-8 ℃.
3. Powtarzalność analizy ELISA w dużym stopniu zależy od konsystencji płukania płytek.Prawidłowe działanie mycia płyt to kluczowe punkty w procedurach ELISA.
4. W celu inkubacji w stałych temperaturach wszystkie próbki i odczynniki muszą unikać ekspozycji na światło, a każda mikropłytka powinna być uszczelniona membraną przykrywającą.

6.2 Procedury operacyjne
1. Doprowadź zestaw testowy do temperatury pokojowej (20-25 ℃) na co najmniej 30 minut, pamiętaj, że każdy płynny odczynnik należy wstrząsnąć, aby równomiernie wymieszać przed użyciem.
2. Przygotowanie roztworu: Rozcieńczyć 40 ml 20x stężonego buforu do płukania wodą dejonizowaną w stosunku 1:19 (1 część 20x stężonego buforu do płukania + 19 części wody dejonizowanej) lub przygotować w razie potrzeby.
3. Umieścić wymagane paski z mikrodołkami w ramkach płytek.Ponownie uszczelniono niewykorzystaną mikropłytkę, przechowywaną w temperaturze 2-8 ℃, nie zamrożoną.
4. Numeracja: ponumeruj mikrostudzienki według próbek i roztworu wzorcowego;każdą próbkę i roztwór wzorcowy należy wykonać w dwóch egzemplarzach;zapisują swoje pozycje.
5. Dodać 50 µl próbki lub roztworu wzorcowego do oddzielnych duplikatów dołków;dodać 50 µL koniugatu enzymu, następnie dodać 50 µL roztworu roboczego przeciwciała do każdego dołka, zamknąć mikropłytkę błoną przykrywającą i inkubować w 25 ℃ przez 30 min.
6. Wylej płyn z mikrostudzienki, klapkę do wyschnięcia na bibule;dodać 250 µl/studzienkę wody dejonizowanej, płukać przez 15-30 sekund, następnie wyjąć i osuszyć papierem chłonnym, powtórzyć 4-5 razy.
7. Barwienie: dodać 50 µl roztworu substratu A, 50 µl roztworu B do każdego dołka.Delikatnie wymieszać przez ręczne potrząsanie płytką i inkubować w 25 ℃ przez 15 min w ciemności w celu zabarwienia.
8. Oznaczanie: dodać 50 µl roztworu zatrzymującego reakcję do każdego dołka.Delikatnie wymieszać przez ręczne potrząsanie płytką.Ustawić długość fali czytnika mikropłytek na 450 nm, aby określić wartość OD każdego dołka.(Zalecamy odczytanie wartości OD przy podwójnej długości fali 450/630 nm w ciągu 5 min).

 

7. Ocena wyniku

Istnieją dwie metody oceny wyników;pierwszy to osąd zgrubny, drugi to określenie ilościowe.Należy zauważyć, że wartość OD próbki ma ujemną korelację z fenyloetanoloaminą A w próbce.

7.1 Ocena jakościowa
Zakres stężeń (ng/mL) można uzyskać z porównania średniej wartości OD próbki z wartością roztworu wzorcowego.Zakładając, że wartość OD próbkiⅠ wynosi 0,3, a próbkiⅡ wynosi 1,0, wartość OD roztworów wzorcowych wynosi: 2,243 dla 0 ppb, 1,866 dla 0,1 ppb, 1,415 dla 0,3 ppb, 0,864 dla 0,9 ppb, 0,413 dla 2,7 ppb 0,155 dla 8,1 ppb, odpowiednio zakres stężeń próbkiⅠ wynosi 0,3 do 0,9 ppb, a próbkiⅡ 2,7 ppb do 8,1 ppb.

7.2 Oznaczenie ilościowe
Średnie wartości absorbancji otrzymane dla średniej wartości OD (B) próbki i roztworu wzorcowego podzielone przez wartość OD (B0) pierwszego roztworu wzorcowego (0 wzorzec), a następnie pomnożone przez 100%, czyli

 

Procent wartości absorbancji =	B	×100%
	B0

 

B — średnia wartość OD próbki lub roztworu wzorcowego
B0 — średnia wartość OD roztworu wzorcowego 0 ng/mL
Narysuj krzywą standardową z procentami absorpcji roztworów wzorcowych i wartościami półlogarytmu wzorcowych roztworów fenyloetanoloaminy A (ng/ml) odpowiednio na osiach Y i X.Odczytaj odpowiednie stężenie próbki z krzywej standardowej, włączając jej procent absorpcji do krzywej standardowej.Otrzymaną wartość mnoży się następnie przez odpowiednią krotność rozcieńczenia, uzyskując ostatecznie rzeczywiste stężenie fenyloetanoloaminy A w próbce.
Korzystanie z profesjonalnego oprogramowania analitycznego tego zestawu będzie wygodniejsze w przypadku dokładnej i szybkiej analizy dużej ilości próbek.(Prosimy o kontakt w sprawie tego oprogramowania)

8. Środki ostrożności

1. Temperatura pokojowa poniżej 25 ℃ lub temperatura odczynników i próbek, które nie zostały przywrócone do temperatury pokojowej (20-25 ℃) doprowadzą do niższej standardowej wartości OD.
2. Suchości mikropłytki w procesie mycia będą towarzyszyć sytuacje obejmujące nieliniowe krzywe wzorcowe i niepożądaną odtwarzalność;Więc przejdź do następnego kroku natychmiast po umyciu.
3. Równomiernie wymieszać, dokładnie wypłukać płytkę, powtarzalność analizy ELISA w dużym stopniu zależy od konsystencji płukania płytki.
4. Roztwór zatrzymujący to 2 M roztwór kwasu siarkowego, unikaj kontaktu ze skórą.
5. Nie używać zestawu po upływie terminu ważności.Użycie rozcieńczonych lub zafałszowanych odczynników z zestawów spowoduje zmiany czułości i wykrywanych wartości OD.Nie należy wymieniać odczynników z zestawów o różnych numerach serii, które mają być używane.
6. Włóż niewykorzystaną mikropłytkę do samouszczelniającego się worka, aby ponownie ją zamknąć.Substancja standardowa i bezbarwna substancja barwiąca są wrażliwe na światło, a zatem nie mogą być bezpośrednio wystawione na działanie światła.
7. Wyrzuć roztwór barwiący o dowolnym kolorze, który wskazuje na degenerację tego roztworu.Wartość wykrywania standardowej solutyny 0 mniejsza niż 0,5 (A450 nm<0,5) wskazuje na jej degenerację.
8. Optymalna temperatura reakcji to 25 ℃, a zbyt wysoka lub niska temperatura spowoduje zmiany czułości wykrywania i wartości OD.

9. Przechowywanie i data ważności

Przechowywanie: przechowywać w temperaturze 2-8 ℃, nie zamrażać.
Termin ważności: 12 miesięcy;data produkcji znajduje się na pudełku.
Uwaga: Jeśli opakowanie próżniowe mikropłytki przecieka, nadal można go używać, nie wpływaj na wynik testu, zrelaksuj się podczas użytkowania.

 

 

 

 

 

P1: Kiedy zostanie wysłany?
A1: Wyślemy towar tak szybko, jak to możliwe w ciągu 7 dni roboczych od otrzymania płatności.(W przypadku czynników zewnętrznych, takich jak epidemia, dostawa może się opóźnić)

 

P2: czy obsługuje OEM/ODM?
A2: Może być obsługiwany, ale określona ilość musi przekraczać 100 000 sztuk, co jest wygodne w przypadku niestandardowych produktów.

 

P3: Jak radzi sobie twoja fabryka pod względem kontroli jakości?
A3: Posiadamy krajowe certyfikaty ISO9001 i ISO13485.Nasz proces produkcyjny jest zgodny ze standardowymi procedurami, aby zapewnić optymalną jakość produktu.

 

P4: Jak zapewnić obsługę posprzedażną?
A4: Zapewniamy profesjonalną techniczną obsługę posprzedażną online.Możemy zapewnić Ci indywidualne wskazówki za pośrednictwem wideo, telefonu itp.

 

P5: Jaka jest metoda płatności?
A5: Otrzymujemy płatność przez T / T.

 

P6: jak wysłać?
A6: Wybierz najlepszą dla siebie metodę wysyłki, otrzymując oferty od naszych wielu współpracujących przewoźników, a także wysyłaj zgodnie z własnymi wymaganiami.